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jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】土壤提取DNA进行pcr反应问题

我用试剂盒从土壤中提出了dna,但是pcr却p不出来,但是阳性对照可以跑出来,请问土壤dna中是什么导致了pcr的失败?
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benno

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
土壤DNA?土壤中微生物种类简直是巨量的,提取出来岂不是超级大杂烩?那怎么PCR?不解
新起点,新征程!路漫漫其修远兮,吾将上下而求索。。。
2楼2009-06-05 08:35:29
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pzhan1982

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
kongsun(金币+2,VIP+0):谢谢你的建议和提醒,欢迎常来环境版! 6-5 12:36
测一下DNA的纯度和浓度,干扰土壤DNA的杂质比较多,特别是腐殖酸、蛋白质等。不知道你用的什么公司的试剂盒,之前有人介绍用天根或者生工的,但价格有点高,大几百块钱,后面自己用手工提,效果还蛮好的,就是要用苯酚和氯仿——有毒啊!
3楼2009-06-05 08:58:54
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lengxing1555

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
土壤DNA提取后,PCR已经很多年了,我们实验室一直做,没什么问题
4楼2009-06-05 16:31:05
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luhaitao84

至尊木虫 (著名写手)

小木虫佛学院首任主持


kongsun(金币+1,VIP+0):谢谢你的提醒,欢迎常来环境版,^_^ 6-6 22:25
土壤DNA提取后,PCR已经很多年了,好像没有什么难度吧
该分析一下你的每一步步骤是不是做好了
不过我觉得天根的东西不好。。。不用它
你知道我是谁,我在哪里
5楼2009-06-06 00:45:31
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lengxing1555

金虫 (小有名气)

可以试EXTaq酶,加BSA
6楼2009-06-07 19:38:09
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jhcln

金虫 (小有名气)


kongsun(金币+1,VIP+0):^_^,鼓励LZ嘎! 7-12 15:05
引用回帖:
Originally posted by lengxing1555 at 2009-6-7 19:38:
可以试EXTaq酶,加BSA

我们实验室以前也做出来了,但是现在不知怎么回事,dna提出来了,就是pcr扩不出来,那以前提出来作为对照,对照却可以扩出来,我们也加bsa,还加了DMSO,找以前曾经做出过的师兄帮我们做也同样出现这种情况,我真是无语了。这位大侠能给我们提点建议吗?
7楼2009-06-15 09:41:39
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xukewei

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
买个DNA片段纯化试剂盒纯化一下,绝对没问题的,我遇到过
Do what you love and love what you do!Do more than you are paid for!
8楼2009-06-16 14:36:11
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jhcln

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xukewei at 2009-6-16 14:36:
买个DNA片段纯化试剂盒纯化一下,绝对没问题的,我遇到过

你也遇到过?我们用了Wizard® Plus Minipreps DNA Purification System(Promega) 试剂盒进行纯化也不行。请问您最后是怎么解决的?
9楼2009-06-25 16:12:34
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katherine1106

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lz,可以试试将DNA稀释,我以前提取的土壤DNA也是p不出来,后来问别人,稀释了一下,果然p出来了
10楼2009-07-06 22:35:32
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