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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 环境生态 » 【求助】土壤提取DNA进行pcr反应问题
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jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】土壤提取DNA进行pcr反应问题

我用试剂盒从土壤中提出了dna，但是pcr却p不出来，但是阳性对照可以跑出来，请问土壤dna中是什么导致了pcr的失败？
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1楼 2009-06-04 23:41:02
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benno

木虫 (著名写手)
★
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土壤DNA？土壤中微生物种类简直是巨量的，提取出来岂不是超级大杂烩？那怎么PCR？不解
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新起点，新征程！路漫漫其修远兮，吾将上下而求索。。。
2楼2009-06-05 08:35:29
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pzhan1982

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
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kongsun(金币+2,VIP+0):谢谢你的建议和提醒，欢迎常来环境版！ 6-5 12:36
测一下DNA的纯度和浓度，干扰土壤DNA的杂质比较多，特别是腐殖酸、蛋白质等。不知道你用的什么公司的试剂盒，之前有人介绍用天根或者生工的，但价格有点高，大几百块钱，后面自己用手工提，效果还蛮好的，就是要用苯酚和氯仿——有毒啊！
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3楼2009-06-05 08:58:54
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lengxing1555

金虫 (小有名气)
★
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土壤DNA提取后，PCR已经很多年了，我们实验室一直做，没什么问题
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4楼2009-06-05 16:31:05
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luhaitao84

至尊木虫 (著名写手)

小木虫佛学院首任主持
★
kongsun(金币+1,VIP+0):谢谢你的提醒，欢迎常来环境版，^_^ 6-6 22:25
土壤DNA提取后，PCR已经很多年了，好像没有什么难度吧
该分析一下你的每一步步骤是不是做好了
不过我觉得天根的东西不好。。。不用它
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你知道我是谁，我在哪里
5楼2009-06-06 00:45:31
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lengxing1555

金虫 (小有名气)
可以试EXTaq酶，加BSA
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6楼2009-06-07 19:38:09
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jhcln

金虫 (小有名气)
★
kongsun(金币+1,VIP+0):^_^，鼓励LZ嘎！ 7-12 15:05
引用回帖:
Originally posted by lengxing1555 at 2009-6-7 19:38:
可以试EXTaq酶，加BSA

我们实验室以前也做出来了，但是现在不知怎么回事，dna提出来了，就是pcr扩不出来，那以前提出来作为对照，对照却可以扩出来，我们也加bsa，还加了DMSO,找以前曾经做出过的师兄帮我们做也同样出现这种情况，我真是无语了。这位大侠能给我们提点建议吗？
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7楼2009-06-15 09:41:39
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xukewei

铁杆木虫 (正式写手)
★
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买个DNA片段纯化试剂盒纯化一下，绝对没问题的，我遇到过
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Do what you love and love what you do!Do more than you are paid for!
8楼2009-06-16 14:36:11
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jhcln

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xukewei at 2009-6-16 14:36:
买个DNA片段纯化试剂盒纯化一下，绝对没问题的，我遇到过

你也遇到过？我们用了Wizard® Plus Minipreps DNA Purification System(Promega) 试剂盒进行纯化也不行。请问您最后是怎么解决的？
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9楼2009-06-25 16:12:34
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katherine1106

木虫 (正式写手)
★
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lz，可以试试将DNA稀释，我以前提取的土壤DNA也是p不出来，后来问别人，稀释了一下，果然p出来了
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10楼2009-07-06 22:35:32
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