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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

[交流] 【求助】请教RTPCR达人试验成功率如何?

如题,最近一直苦于用PCR来给基因组中的某基因进行相对定量,发现试验数据基本不靠谱,因试验原理与实时定量PCR有许多相似之处,故请教各位达人,RT-PCR试验的成功率如何,做多少次才能出一次像样的结果?
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金币是赌出来的
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


wjswj(金币+1,VIP+0):谢谢:) 6-8 10:56
实验结果反复其实很大原因是条件没稳定下来
比如反转录的时候,加入的RNA的质量和浓度是否一致?
7楼2009-06-05 16:01:52
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

你做的是 real time 还是普通RT?
2楼2009-06-05 05:30:41
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Shengjing

铁虫 (初入文坛)

你应该指的是real time PCR吧。

这个很难说,看你的实验设计,要做的基因是什么。说的详细一点让大家好讨论啊。
3楼2009-06-05 08:32:13
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

实时定量PCR,非反转录PCR。举例,在某生物基因组内,理论上x基因的拷贝数是y基因拷贝数的2倍,通过优化引物PCR条件等手段想在实时定量PCR上反映出x与y的关系(即x:y=2:1)。请问这种试验的理想结果出现的次数能占所作试验的总次数的多少啊?
金币是赌出来的
4楼2009-06-05 09:17:43
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