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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » CRISPRCas9基因敲除需要加入donor DNA吗
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wxsj110

新虫 (初入文坛)

[求助] CRISPRCas9基因敲除需要加入donor DNA吗已有2人参与

请问使用CRISPR Cas9进行基因敲除，DNA双链断裂后需要加入donor DNA吗。感谢！
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1楼2019-09-23 09:28:57
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ELF1

新虫 (小有名气)
一般都是需要的

发自小木虫Android客户端
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2楼2019-09-23 11:49:52
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-09-23 20:39:34
knockout一般不需要donor dna，knockin或者mutation需要修复模板进行同源重组。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wxsj110
2019更好更棒!
3楼2019-09-23 12:08:12
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wxsj110

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by GRUBBY_WU at 2019-09-23 12:08:12
knockout一般不需要donor dna，knockin或者mutation需要修复模板进行同源重组。

谢谢!  我有一点不明白，基因敲除靶基因双链DNA断裂，不会自动复原吗，是如何造成靶基因被knockout的呢？
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4楼2019-09-23 14:54:25
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-09-23 20:39:51
本帖仅楼主可见
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5楼2019-09-23 16:07:37
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wxsj110 at 2019-09-23 14:54:25
谢谢!  我有一点不明白，基因敲除靶基因双链DNA断裂，不会自动复原吗，是如何造成靶基因被knockout的呢？...

如果不加donor dna（修复模板），双链断裂的DNA会进行非同源末端链接（NHEJ）的修复方式，有一定概率会引入insert或delete，这种变化会造成功能基因失活。
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2019更好更棒!
6楼2019-09-24 12:40:13
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刘小小香

新虫 (小有名气)
加同源重组片段更加靠谱

发自小木虫Android客户端
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7楼2019-09-27 22:45:25
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我太秀了

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果是细胞系做knockout的话，不需要加入donor的，做Knockin或者mutation就需要的；如果是菌的基因编辑，一般都是需要加donor的
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专注细胞和微生物基因编辑知识分享
8楼2020-04-13 10:32:20
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