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分子小白呀

新虫 (小有名气)

[交流] PCR无条带 已有4人参与

我连接转化后的菌液,放4度冰箱差不多有两个月了,今天重新涂了平板,蓝白斑筛选后,按正常程序跑了PCR,电泳,PCR Mix用的新买的康为2xEs Tap MasterMix,跑了100多个菌液的样,但是没有一条条带,请问是哪里出了问题呢?菌液放太久不能用了吗?分子新手,求助高人指导

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if mine

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
真要分析的话,可能性还挺多的。如果质粒没有丢失,蓝白斑实验也可能出现假阳。质粒丢失的话,抗性失效,如果你倒平板的LB温度过高,抗生素失效了,菌落也能长起来,你再去p,肯定啥也没有。个人觉得还是放的时间太长了,质粒丢失。反正自己慢慢排除故障因素吧,如果都没问题,换个酶试试?康为的我没用过,最近试用了个公司的酶,效果挺好的。哪家我就不说了,省得说我是托,想讨论的私信我吧
5楼2023-09-01 09:04:58
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pl19940314

银虫 (正式写手)

一般你之前跑过有的,后面应该都在,除非。你没连接上

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-开心,爽朗。愉悦
2楼2019-09-19 00:22:36
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z457634588

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你猜两个月质粒在抗生素逐渐消耗完的情况下会不会丢失?

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3楼2019-09-19 15:35:09
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格洛米吃草

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主问题找到什么原因了吗
4楼2023-08-24 11:38:01
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