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分子小白呀

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 313
帖子: 109
在线: 7小时
虫号: 13871181
注册: 2019-01-21
专业: 植物生理与生化

[交流] PCR无条带已有4人参与

我连接转化后的菌液，放4度冰箱差不多有两个月了，今天重新涂了平板，蓝白斑筛选后，按正常程序跑了PCR，电泳，PCR Mix用的新买的康为2xEs Tap MasterMix，跑了100多个菌液的样，但是没有一条条带，请问是哪里出了问题呢？菌液放太久不能用了吗？分子新手，求助高人指导

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1楼 2019-09-18 20:37:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

if mine

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 121
帖子: 19
在线: 59分钟
虫号: 34093461
注册: 2023-08-31
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

真要分析的话，可能性还挺多的。如果质粒没有丢失，蓝白斑实验也可能出现假阳。质粒丢失的话，抗性失效，如果你倒平板的LB温度过高，抗生素失效了，菌落也能长起来，你再去p，肯定啥也没有。个人觉得还是放的时间太长了，质粒丢失。反正自己慢慢排除故障因素吧，如果都没问题，换个酶试试？康为的我没用过，最近试用了个公司的酶，效果挺好的。哪家我就不说了，省得说我是托，想讨论的私信我吧