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蔓菁

金虫 (正式写手)


[交流] 帮我看看这张图

PCR扩出的带,有些事如图的样子,请问这是怎么回事?不好读带啊,我是做遗传多样性。
第一个 1983 产物片断 307 bp,第二个5249大小是351bp

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:51 ]
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ziman2003

银虫 (小有名气)

★ ★
蔓菁(金币+2,VIP+0):Thank you 6-3 09:37
具体的原因我不能肯定。不过我认为有几点:1、胶跑的不好,marker都跑得不是很清楚 。2、你的样品,也就是模板的纯度不好,可能有杂质,这会影响你的pcr结果。3、引物是否也要考虑一下。遗传多样性?是做分子标记吗?跑的是琼脂糖还是聚丙烯酰胺呢?
具体试验具体分析拉!
2楼2009-06-03 09:13:16
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蔓菁

金虫 (正式写手)


amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-3 11:26
这个一看就因该知道是PAGE胶, Marker 我跑的都是这个样子,不管是做得好还是不好,上面的没有跑开。模板没问题,因为我已经做了100多对引物了。就是有些带成这个样子。可能胶有问题,可能电泳时间和电压得优化?
110v, 120min
3楼2009-06-03 09:36:42
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biogefart

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by ziman2003 at 2009-6-3 09:13:
具体的原因我不能肯定。不过我认为有几点:1、胶跑的不好,marker都跑得不是很清楚 。2、你的样品,也就是模板的纯度不好,可能有杂质,这会影响你的pcr结果。3、引物是否也要考虑一下。遗传多样性?是做分子标记 ...

楼主的片段很小,所以胶浓度估计比较高,所以上部marker肯定会聚集,楼主的电泳槽多大的?这种情况减小电压,增加时间会好些
闹太套
4楼2009-06-03 10:30:33
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

胶浓度有点高吧。在降低电压,时间跑长点。
5楼2009-06-03 11:09:23
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静水8078

木虫 (著名写手)

总之要从新跑了,PCR体系在优化一下
6楼2009-06-03 11:14:24
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bbyu007

木虫 (正式写手)

首先,胶做得不好,连marker都跑的很差,建议好好做胶!
其次,模板不纯,所以你的样品跑不开,有拖尾和smear,建议纯化模板,优化PCR体系。

[ Last edited by bbyu007 on 2009-6-5 at 09:42 ]
我是笨笨鱼~~~
7楼2009-06-03 12:47:39
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lifefamily

用进口胶吧~~
8楼2009-06-03 13:38:40
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蔓菁

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by biogefart at 2009-6-3 10:30:


楼主的片段很小,所以胶浓度估计比较高,所以上部marker肯定会聚集,楼主的电泳槽多大的?这种情况减小电压,增加时间会好些

102孔 垂直电泳曹,在别的实验室做的  规格不知道  一块胶45ml (8%的聚丙烯酰胺)
9楼2009-06-03 21:52:56
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蔓菁

金虫 (正式写手)


再发几张,请大家帮我分析分析

有些是PAGE胶,有些是AGAROSE胶
有的是2个月前做的,有几张是近几天做的。
非常感谢,只不好以身相许了。
10楼2009-06-03 22:05:46
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