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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮我看看这张图
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蔓菁

金虫 (正式写手)

[交流] 帮我看看这张图

PCR扩出的带，有些事如图的样子，请问这是怎么回事？不好读带啊，我是做遗传多样性。
第一个 1983 产物片断 307 bp，第二个5249大小是351bp

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:51 ]
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1楼 2009-06-03 09:05:58
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ziman2003

银虫 (小有名气)
★ ★
蔓菁(金币+2,VIP+0):Thank you 6-3 09:37
具体的原因我不能肯定。不过我认为有几点：1、胶跑的不好，marker都跑得不是很清楚 。2、你的样品，也就是模板的纯度不好，可能有杂质，这会影响你的pcr结果。3、引物是否也要考虑一下。遗传多样性？是做分子标记吗？跑的是琼脂糖还是聚丙烯酰胺呢？
具体试验具体分析拉！
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2楼2009-06-03 09:13:16
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蔓菁

金虫 (正式写手)
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-3 11:26
这个一看就因该知道是PAGE胶， Marker 我跑的都是这个样子，不管是做得好还是不好，上面的没有跑开。模板没问题，因为我已经做了100多对引物了。就是有些带成这个样子。可能胶有问题，可能电泳时间和电压得优化？
110v, 120min
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3楼2009-06-03 09:36:42
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biogefart

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by ziman2003 at 2009-6-3 09:13:
具体的原因我不能肯定。不过我认为有几点：1、胶跑的不好，marker都跑得不是很清楚 。2、你的样品，也就是模板的纯度不好，可能有杂质，这会影响你的pcr结果。3、引物是否也要考虑一下。遗传多样性？是做分子标记 ...

楼主的片段很小，所以胶浓度估计比较高，所以上部marker肯定会聚集，楼主的电泳槽多大的？这种情况减小电压，增加时间会好些
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闹太套
4楼2009-06-03 10:30:33
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
胶浓度有点高吧。在降低电压，时间跑长点。
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5楼2009-06-03 11:09:23
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静水8078

木虫 (著名写手)
总之要从新跑了，PCR体系在优化一下
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6楼2009-06-03 11:14:24
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bbyu007

木虫 (正式写手)
首先，胶做得不好，连marker都跑的很差，建议好好做胶！
其次，模板不纯，所以你的样品跑不开，有拖尾和smear，建议纯化模板，优化PCR体系。

[ Last edited by bbyu007 on 2009-6-5 at 09:42 ]
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我是笨笨鱼~~~
7楼2009-06-03 12:47:39
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lifefamily

用进口胶吧~~
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8楼2009-06-03 13:38:40
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蔓菁

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by biogefart at 2009-6-3 10:30:


楼主的片段很小，所以胶浓度估计比较高，所以上部marker肯定会聚集，楼主的电泳槽多大的？这种情况减小电压，增加时间会好些

102孔 垂直电泳曹，在别的实验室做的  规格不知道  一块胶45ml (8%的聚丙烯酰胺）
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9楼2009-06-03 21:52:56
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蔓菁

金虫 (正式写手)

再发几张，请大家帮我分析分析

有些是PAGE胶，有些是AGAROSE胶
有的是2个月前做的，有几张是近几天做的。
非常感谢，只不好以身相许了。
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10楼2009-06-03 22:05:46
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