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泽雅的说

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 染色体步移法扩启动子

本人近两个月在扩启动子,之前有一个基因扩到了700+bp,用的是TAKARA 染色体步移试剂盒,后来继续设计引物,结果第三轮的时候出现了涂抹带,本人尝试提高退火温度,改变模板浓度等依然没有进展,现在不知道该如何进展下一步实验,希望大神看到能指点指点!在此谢过啦
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lxk2018

新虫 (初入文坛)

请问后来是怎么解决的?
2楼2019-09-15 13:09:04
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oylb2

新虫 (小有名气)

takara的试剂盒容易遇到这样的问题,它的优势是简单便宜,一个两个基因适合用,扩增多长就是碰运气了。

十年前用过其他公司试剂盒,质量远远好于takara,90%以上能扩增到4kb以上,但是手续复杂,适合大量基因的上游扩增

发自小木虫Android客户端
3楼2019-09-22 09:33:12
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抚指依觞

新虫 (著名写手)

有一篇SCI论文,里面创新了一种方法,可以很好的扩增出已知序列的两段片段,里面的引物和方法非常好用,几年来完全没问题

发自小木虫Android客户端
4楼2019-10-31 12:15:30
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 抚指依觞 at 2019-10-31 12:15:30
有一篇SCI论文,里面创新了一种方法,可以很好的扩增出已知序列的两段片段,里面的引物和方法非常好用,几年来完全没问题

请求指教
5楼2020-03-08 12:49:19
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抚指依觞

新虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2020-03-08 12:49:19
请求指教...

百度学术里面找吧,具体叫啥名字我记不得了,一篇SCI,好像是接头巢式PCR,一共需要跑三轮,特殊的程序和11个引物(Fsp1-Fsp9,F2,F3),加上自行设计的三个引物。

发自小木虫Android客户端
6楼2020-03-08 17:35:41
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