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[交流]
关于使用高压破碎机提取蛋白 已有9人参与
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我是做蛋白原核表达的，诱导表达之后用的是超声破碎，破碎效果一直不太好，破好几遍菌液还是很浑，产热也特别严重，而且破一批样品需要一下午，比较浪费时间。 最近正好隔壁实验室新买了一台高压细胞破碎机UH-06，借用了一下发现效果还不错，在这里分享一下心得体会。 我破的是大肠杆菌，使用的时候压力加到了800 bar，以这个压力破碎了两遍样品就很清澈了，而且跑电泳之后发现蛋白量也比超声破碎时高了一些，分析之后认为应该是高压破碎产热少，出料温度比较低，所以对蛋白的影响会小一些。而使用超声破碎仪破碎之后样品的温度通常会很高，放冰浴里效果也不大。 我的样品量大概有100 mL，在800bar条件下用高压破碎机破两遍也只要10分钟，跟超声破碎比起来就会节省很多时间。 总体用下来还是感觉高压破碎比超声破碎用起来方便一些。但大部分实验室现在都用的是超声破碎，高压破碎机好像知道的也比较少？ 有其他用过高压细胞破碎机的大神们也可以交流一下使用心得。 |
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Fishsh
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高压破碎要注意3点:1.压力都会转化成热能，高压腔瞬间升温很快，物料流速近1000米/秒的速度，目前科技手段没有办法真正实现高压腔低温，所以能达到破碎效果时，使用压力越低产热越少是最有意义的！千万别迷信什么品牌压力多高的参数！2.高压时物料中的颗粒物就像子弹打靶一样，所以机器中破碎阀的材质非常重要，破碎酵母一定要用金刚石，普通硬质合金一下就磨损掉！3.压力释放距离越短破碎效果就会越好，所以如果你够专业，可以看看阀的边宽，越小越好，用一段时间看看有没有磨痕，正常的都是镜面加工的！ 以上仅供参考 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2019-10-27 16:42:30
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我本科用过聚能的，体积很大，好处是能用小量，后来用过加拿大ats的，破大肠还可以，体积也小，不过一年要花几千买那个阀门，破酵母不太行，估计只有百分之三四十的破碎率了 发自小木虫IOS客户端 |
8楼2019-10-25 21:48:14
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
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请问你的100ml是菌体100ml还是离心后重悬的100ml？ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2019-08-26 11:56:58
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高压破碎机的效率比超声快很多，同样的样品做实验超声需要45分钟而且探头很容易坏，高压破碎机5分钟就能达到破碎效果，还是比较喜欢使用的操作也比较简单 发自小木虫Android客户端 |
10楼2020-03-04 10:26:24
