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分子小白呀

新虫 (小有名气)

[交流] cDNA浓度和OD值问题 已有1人参与

作为分子新手,好多小问题都没办法确定,想问一下大家,反转录之后,怎么测定cDNA的浓度?需要稀释多少倍?实验室有Nano drop 2000可以用,另外,多大的浓度可以用于下一步的PCR?260/280和260/230的比值多少比较正常?我是做基因克隆,目的基因片段319bp。感谢前辈不吝赐教!

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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)


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逆转录一般默认转录效率是固定的,因为是相对定量,用你加入逆转录的rna定量
2楼2019-08-22 11:54:34
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cdna稀释倍数看个人习惯,一个pcr反应需要的cdna量根据你用试剂说明书确定就行,稀释倍数自己把握。

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3楼2019-08-22 11:56:48
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

cdna用量参考pcr试剂说明书就行了

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4楼2019-08-22 11:57:20
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

喜欢度比值,一般在rna这一步测。具体范围不太记得了,百度一下就可以。

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5楼2019-08-22 11:58:04
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-08-22 22:15:52
片段不大,怎么弄都行。做真核表达载体的话,注意移码,方向。其他都还好找个做过的人带你做一遍就很简单了。

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6楼2019-08-22 11:59:55
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