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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒转农杆菌菌液PCR总是不行，什么问题呀？
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小千100

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒转农杆菌菌液PCR总是不行，什么问题呀？ 已有2人参与

如题，重组质粒转农杆菌，在抗性平板长了挺多单菌落，但是用通用引物pcr扩增插入的目的片段扩不出来，阔出来的吧就又有多条带，感觉目的条带也不是很准确，这是什么问题呢？求各位老师解答，谢谢！

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1楼 2019-08-19 13:36:25
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-08-23 22:30:13
用目的基因特异性引物好通用引物交叉进行PCR,扩增不出来的话估计都是假阳性吧，挑20个克隆鉴定，如果都不是重新做吧。
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2楼2019-08-19 18:12:07
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小千100

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-08-19 18:12:07
用目的基因特异性引物好通用引物交叉进行PCR,扩增不出来的话估计都是假阳性吧，挑20个克隆鉴定，如果都不是重新做吧。

用载体通用引物上游和片段引物下游会好些是嘛？需要挑这么多单克隆么，我就每次挑4.5个

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3楼2019-08-23 18:09:57
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梦★腾飞

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-11-29 21:55:38
我一直在做转基因的，基本每次挑单菌都要10个以上，部分抗性的假阳性成分很大，另外重组时间可以适当延长，增加连接的几率
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May the force be with you
4楼2019-11-28 12:50:54
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