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guyue2885

银虫 (正式写手)

[交流] 大家帮忙分析一下~~RNA提取图片



Marker左边,我用的是天泽的一个试剂盒,电泳时间延长发现28和18s间有其他条带,18和5s间也有,这是什么?
marker右边用的是Trizol法提取,拖尾是怎么回事啊  而且点样口有荧光,是因为蛋白残留么?
谢谢  请教各位专家哈~~

[ Last edited by guyue2885 on 2009-5-31 at 17:15 ]
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guyue2885

银虫 (正式写手)

做普通的RT应该没什么问题吧~~
2楼2009-05-31 19:48:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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国产核酸纯化试剂盒只有天根的能见人吧……
拖尾是正常的,总RNA自然是不同长度的
上面的一点点带怀疑是gDNA……加氯仿离心后宁可损失也不要吸到红色的部分哦~
3楼2009-05-31 19:58:16
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guyue2885

银虫 (正式写手)

谢谢~~试剂盒提了几次都带基因组DNA  Trizol法好些  你说的很对
4楼2009-05-31 21:56:01
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350784478

木虫 (正式写手)

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要想做RT,那要看你的基因表达量如何了,要是很高,应该没有问题,要是表达丰度比较低的话,那最好还是重新提。我就用一般的TRIZOL提取法,电泳图非常好,你可以试一下,我根本就没有用什么试剂盒。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
5楼2009-05-31 22:28:31
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

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这个个人认为左边RNA提的不错,如果你是植物叶片的话,有可能5-7条带,主要是由于叶绿体的线粒体中的RNA也被抽提出来了,后边的是DNA,不知道你是否已经加了dnase;右边的可能是浓度较高,有些拖尾,部分RNA降解,但是也可以做rt用,点样孔量的话,就是有杂质多糖和蛋白,还有多酚了物质,因为你的浓度已经很高了,所以当然杂质也相对多一些

[ Last edited by sutao1979 on 2009-6-1 at 02:48 ]
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2009-06-01 02:46:51
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guyue2885

银虫 (正式写手)

谢谢  我没加DNase处理  想做cDNA文库怕DNase处理后影响 还是优化提取方法吧
浓度的确有点高  我点样量就一微  
谢谢大家
7楼2009-06-01 11:24:26
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Milanmy

银虫 (小有名气)

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不用DNase处理的话,Qiagen的试剂盒也有gDNA残留,这是避免不了的。提叶片应该是有多条带的,但我用Qiagen和MN的kit提的叶片RNA在28S和18S之间没有条带,18S下边应该有4-5条带,没准跟材料品种有关吧。你可以去Qiagen和MN公司网站上看一下他们的电泳图,我提出来和他们的是一样的。
8楼2009-06-01 13:13:01
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weeqiang

铜虫 (小有名气)


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点样口的应该是基因组吧
我最近也是在做这方面的提取的RNA感觉很不错,但是做了RT后就是扩不出来
我那个表达量很低,而且目的条带很大 不知道什么原因!
9楼2009-06-01 13:25:36
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amilie030312

金虫 (正式写手)


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右边的是有gDNA残留,但是你下游要做文库,不能再用酶处理了,文库对酶反映抑制剂的残留要求比较严格,另外做文库要求RNA的完整性,左边的结果完整性比较好,如果你只是做总RNA然后下游RT,那么用右边的结果去一下基因组污染就可以做了,但是你做文库或者芯片建议你还是用左边的结果吧,提的已经不错了,拖带是因为稍微有些降解了。
10楼2009-06-01 14:49:12
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