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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家帮忙分析一下~~RNA提取图片
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guyue2885

银虫 (正式写手)

[交流] 大家帮忙分析一下~~RNA提取图片



Marker左边，我用的是天泽的一个试剂盒，电泳时间延长发现28和18s间有其他条带，18和5s间也有，这是什么？
marker右边用的是Trizol法提取，拖尾是怎么回事啊  而且点样口有荧光，是因为蛋白残留么？
谢谢  请教各位专家哈~~

[ Last edited by guyue2885 on 2009-5-31 at 17:15 ]
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1楼 2009-05-31 16:53:33
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guyue2885

银虫 (正式写手)
做普通的RT应该没什么问题吧~~
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2楼2009-05-31 19:48:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-31 20:01
国产核酸纯化试剂盒只有天根的能见人吧……
拖尾是正常的，总RNA自然是不同长度的
上面的一点点带怀疑是gDNA……加氯仿离心后宁可损失也不要吸到红色的部分哦~
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3楼2009-05-31 19:58:16
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guyue2885

银虫 (正式写手)
谢谢~~试剂盒提了几次都带基因组DNA  Trizol法好些  你说的很对
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4楼2009-05-31 21:56:01
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350784478

木虫 (正式写手)
★ ★
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要想做RT,那要看你的基因表达量如何了，要是很高，应该没有问题，要是表达丰度比较低的话，那最好还是重新提。我就用一般的TRIZOL提取法，电泳图非常好，你可以试一下，我根本就没有用什么试剂盒。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
5楼2009-05-31 22:28:31
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 20:46
这个个人认为左边RNA提的不错，如果你是植物叶片的话，有可能5-7条带，主要是由于叶绿体的线粒体中的RNA也被抽提出来了，后边的是DNA，不知道你是否已经加了dnase；右边的可能是浓度较高，有些拖尾，部分RNA降解，但是也可以做rt用，点样孔量的话，就是有杂质多糖和蛋白，还有多酚了物质，因为你的浓度已经很高了，所以当然杂质也相对多一些

[ Last edited by sutao1979 on 2009-6-1 at 02:48 ]
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-06-01 02:46:51
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guyue2885

银虫 (正式写手)
谢谢  我没加DNase处理  想做cDNA文库怕DNase处理后影响 还是优化提取方法吧
浓度的确有点高  我点样量就一微  
谢谢大家
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7楼2009-06-01 11:24:26
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Milanmy

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+2,VIP+0):鼓励一下！ 6-1 13:25
不用DNase处理的话，Qiagen的试剂盒也有gDNA残留，这是避免不了的。提叶片应该是有多条带的，但我用Qiagen和MN的kit提的叶片RNA在28S和18S之间没有条带，18S下边应该有4-5条带，没准跟材料品种有关吧。你可以去Qiagen和MN公司网站上看一下他们的电泳图，我提出来和他们的是一样的。
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8楼2009-06-01 13:13:01
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weeqiang

铜虫 (小有名气)
★
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点样口的应该是基因组吧
我最近也是在做这方面的提取的RNA感觉很不错，但是做了RT后就是扩不出来
我那个表达量很低，而且目的条带很大 不知道什么原因！
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9楼2009-06-01 13:25:36
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
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右边的是有gDNA残留，但是你下游要做文库，不能再用酶处理了，文库对酶反映抑制剂的残留要求比较严格，另外做文库要求RNA的完整性，左边的结果完整性比较好，如果你只是做总RNA然后下游RT，那么用右边的结果去一下基因组污染就可以做了，但是你做文库或者芯片建议你还是用左边的结果吧，提的已经不错了，拖带是因为稍微有些降解了。
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10楼2009-06-01 14:49:12
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