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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 关于随即引物扩增的问题

各位虫友有做过随机引物PCR的吗?  大家的随机引物是怎么来的  自己设计的还是从公司买的?  我想用随机引物进行PCR  之后想把产物连到载体上构建一个小文库    大家有做过的吗  能否指导一下   不胜感激  谢谢!!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:19 ]
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Milanmy

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
Random引物都是做RT用的,可以直接用。PCR产物连接T载体是可以的,我就用有多条带的PCR产物连接Fermentas的pJET载体,但低丰度的可能要做50次菌落PCR才能找到一个,这还是能看见明显条带的。如果要做的话推荐你用Fermentas的pJET PCR cloning kit,连接效率和阳性率比其他T载体要高很多。不过这么做就得看运气了。
6楼2009-06-02 18:34:54
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临风7071

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
随机引物是从公司买的,各个公司的不一样的
2楼2009-05-31 10:17:19
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Milanmy

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反转录试剂盒里都有随机引物。曾经听到过有人想用ATG再加几个随机序列做文库的,后来也没有做,个人认为这么做文库可能不是很好,片段太杂,低丰度的转录本可能得不到。
3楼2009-06-01 13:37:30
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欣晴5832

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
随机引物是从公司买的,还要筛一些能用的
4楼2009-06-01 14:00:23
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