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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于随即引物扩增的问题
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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 关于随即引物扩增的问题

各位虫友有做过随机引物PCR的吗？  大家的随机引物是怎么来的  自己设计的还是从公司买的？  我想用随机引物进行PCR  之后想把产物连到载体上构建一个小文库    大家有做过的吗  能否指导一下   不胜感激  谢谢！！！

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:19 ]
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1楼 2009-05-31 10:14:35
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临风7071

木虫 (正式写手)
★
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随机引物是从公司买的，各个公司的不一样的
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2楼2009-05-31 10:17:19
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Milanmy

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反转录试剂盒里都有随机引物。曾经听到过有人想用ATG再加几个随机序列做文库的，后来也没有做，个人认为这么做文库可能不是很好，片段太杂，低丰度的转录本可能得不到。
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3楼2009-06-01 13:37:30
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
随机引物是从公司买的，还要筛一些能用的
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4楼2009-06-01 14:00:23
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playboy723

金虫 (正式写手)
谢谢大家了   
有更详细具体的信息没   比如说买回来的随机引物不用处理就能用吗？
我打算将随机引物PCR之后的产物连到T载体上   大家觉得这样可行吗？
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5楼2009-06-01 16:56:41
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Milanmy

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Random引物都是做RT用的，可以直接用。PCR产物连接T载体是可以的，我就用有多条带的PCR产物连接Fermentas的pJET载体，但低丰度的可能要做50次菌落PCR才能找到一个，这还是能看见明显条带的。如果要做的话推荐你用Fermentas的pJET PCR cloning kit，连接效率和阳性率比其他T载体要高很多。不过这么做就得看运气了。
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6楼2009-06-02 18:34:54
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