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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 两片段与载体连接
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brightjoe

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 两片段与载体连接

两片段（大小600、800左右）与载体（4800左右）连接，我的连接体系做了4个（15μL）：片段A:1 片段B:1 载体: 1/1.5/2/3 T4连接酶:1 10*buffer：1.5 水补足至15μL,排除感受态的问题，没有长出克隆，请问什么原因呢？希望大家不吝赐教。附上纯化过的电泳图（右边两片段条带很亮，质粒较暗）

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 19:03 ]
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1楼 2009-05-31 09:51:35
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把载体多加点试一下.三片断连接酶切位点要设计好.
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2楼2009-05-31 10:07:52
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weiwei1

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
照图片看，感觉是片段加的稍微多了些
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3楼2009-05-31 10:26:54
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brightjoe

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2009-5-31 10:07:
把载体多加点试一下.三片断连接酶切位点要设计好.

我载体加到4μL了，还是没有连上。
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4楼2009-05-31 13:07:48
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ilaveu

木虫 (著名写手)
为什么不先连接2个片段
成功后再连第三个片段

三片段直接连效率很高吗？
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5楼2009-05-31 14:41:38
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你调整一下片段和载体的相对浓度，连接时间长一点再试试！
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6楼2009-05-31 15:00:19
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体的亮度不够说明你的载体回收的量太少，应该多加！试一试7：1或者 5：3的比例吧！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
7楼2009-05-31 16:56:08
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