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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 大肠杆菌中β葡萄糖醛酸苷酶酶活测定
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哟嚯哈哈哈哈

新虫 (初入文坛)
已领完
大肠杆菌中β葡萄糖醛酸苷酶酶活测定
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用试剂盒测定酶活，始终无法显色。试剂盒原理是酶和底物反应，显色后用酶标仪测OD值。最初做法是，我们将大肠沉淀洗涤后进行超声破碎，取上清液为样品加入试剂盒。
发现不显色后，进行如下改进：
1.在超声破碎中采用不同缓冲液，包括PBS、tris盐酸、不同ph的缓冲液（查找文献描述该酶最适ph为7或5）
2.在超声破碎过程中或超声破碎完成后加入提取液
3.延长酶和底物反应时间
4.缩短超声破碎是工作时间，延长工作间隙，减小超声破碎对酶活的影响
5.加大菌量，使酶量增加
6.采用液氮研磨破碎细菌的方法，尽可能减小使酶活降低的因素

前5种改进，OD值几乎与空白相同，第6种方法OD值只加大一点点，但我们仍不确定。

有没有大佬做过类似实验并知道问题出在哪里或者大致方向，我们可以一起探讨，望大家告知。
感激不尽！

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1楼 2019-08-10 21:18:59
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糖果小米

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是用的哪种方法检测的？
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12楼2019-08-12 17:14:33
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taozi2014

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个酶适合在大肠杆菌表达吗？有没有翻译后修饰？

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11楼2019-08-10 23:38:12
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zhuzhilin0510楼
2019-08-10 21:38   回复  
哟嚯哈哈哈哈(金币+1): 谢谢参与
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hdchina20102楼
2019-08-10 21:20   回复  
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reggae5楼
2019-08-10 21:25   回复  
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?o火3楼
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abc8765244084楼
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秋土豆香9楼
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zzyzzyearth7楼
2019-08-10 21:27   回复  
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数列矩阵6楼
2019-08-10 21:27   回复  
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完颜小苏8楼
2019-08-10 21:36   回复  
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