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哟嚯哈哈哈哈

新虫 (初入文坛)


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大肠杆菌中β葡萄糖醛酸苷酶酶活测定
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用试剂盒测定酶活,始终无法显色。试剂盒原理是酶和底物反应,显色后用酶标仪测OD值。最初做法是,我们将大肠沉淀洗涤后进行超声破碎,取上清液为样品加入试剂盒。
发现不显色后,进行如下改进:
1.在超声破碎中采用不同缓冲液,包括PBS、tris盐酸、不同ph的缓冲液(查找文献描述该酶最适ph为7或5)
2.在超声破碎过程中或超声破碎完成后加入提取液
3.延长酶和底物反应时间
4.缩短超声破碎是工作时间,延长工作间隙,减小超声破碎对酶活的影响
5.加大菌量,使酶量增加
6.采用液氮研磨破碎细菌的方法,尽可能减小使酶活降低的因素

前5种改进,OD值几乎与空白相同,第6种方法OD值只加大一点点,但我们仍不确定。

有没有大佬做过类似实验并知道问题出在哪里或者大致方向,我们可以一起探讨,望大家告知。
感激不尽!

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taozi2014

银虫 (正式写手)



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这个酶适合在大肠杆菌表达吗?有没有翻译后修饰?

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11楼2019-08-10 23:38:12
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糖果小米

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是用的哪种方法检测的?
12楼2019-08-12 17:14:33
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yaojm3948

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
内容已删除
13楼2019-09-05 16:45:44
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2019-08-10 21:20   回复  
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?o火3楼
2019-08-10 21:23   回复  
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reggae5楼
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