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yuanfeng金虫 (小有名气)
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[交流]
求助 蛋白表达
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我要过表达大肠杆菌的一个基因，PCR后连接到载体上，转化DH5，然后测序，序列没问题。启动子用的T7，操作子lac，rbs序列和ATG都是用的载体上的，而且验证了没有出现移码突变。载体是pETDuet-1,IPTG诱导用的1mM,但是SDS-page电泳和原始菌株几乎一样，按照道理来说应该很多的。大家有没有遇到过类似的情况，介绍一下解决办法吧。 做样品用一下步骤： 1ml菌液离心后，用上样缓冲液200ul重悬，100度煮5min,离心后直接上样。 谢谢大家，自己和师兄师姐讨论很久，也没找到原因。谢谢大家。 |
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