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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wuqicheng123

木虫 (正式写手)

[交流] HPLC分离度与重现性

在做一个样品HPLC条件的优化时,遇到个问题向大家请教下

用的HPLC-ELSD-UV.上次做的时候,其中各个成分分离度良好
今天作的时候,分离度就不行了,原来分开的三个峰现在都堆叠在一起了.仪器和仪器方法都没有变,同一个梯度洗脱,样品也是同一个样品,柱子也是同一个柱子

为什么就重现不出来了呢?可能有哪些原因呢?有知道的高手解释下,小弟在这谢过了!!
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1楼 2009-05-29 14:41:59
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naren4545

木虫 (正式写手)
★
wuqicheng123(金币+1,VIP+0):能说明如何再生色谱柱么?谢谢 5-29 15:34
柱效下降了，再生色谱柱试试！
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2楼2009-05-29 14:50:35
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liuke009

铁杆木虫 (著名写手)
★
wuqicheng123(金币+1,VIP+0):能说明原因么?谢谢 5-29 15:34
充分冲洗柱子
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3楼2009-05-29 15:00:08
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五四青年772

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wuqicheng123(金币+8,VIP+0):好详细阿 在这学习了 5-29 16:00
样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低 。

使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)

柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，柱外死体积要小

如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。这种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相（与柱内相同）填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。

还有一种可能是柱温的问题.温度不稳定会影响溶剂（甲醇，乙腈）的溶解度。通常温度低组分保留时间增长，对于大都数性质稳定的组分来说，冬天与夏天分析同一样品，温度的影响会改变出峰的时间，峰形稍有所变，另分离度可能会受一些影响，但影响程度不至于不能重复分离条件.
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4楼2009-05-29 15:56:05
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北斗星星

至尊木虫 (知名作家)

老版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
柱子是不是没有平衡好啊
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大步向前
5楼2009-05-29 16:06:55
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EdwardLau

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
佳怡(金币+2,VIP+0):感谢:) 5-30 08:32
先看看柱效，如果没问题的话，流动相如果不合格也会影响分离的，你也可以降低浓度试试
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不求十全十美，但求问心无愧
6楼2009-05-29 20:26:52
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shilywzz

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 6-2 11:21
如果你没用柱温箱的话，可能是现在天热了。
把温度降下来吧
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7楼2009-06-02 09:38:53
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