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欣晴5832

金虫 (小有名气)


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有的公司一个反应可以测到800bp左右,克隆后测序准确度高,PCR产物测序多测几个看序列是否一致,有无杂峰,如果没有也可以。
21楼2009-05-31 08:15:49
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feng6710

新虫 (初入文坛)

我一直用菌液
22楼2009-05-31 09:07:55
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

还是送菌液比较合适。
加入不加入甘油问题不大,只要有个活菌带质粒就ok。呵呵这个不是很严格。
测序品质五花八门,还是找信誉比较大比较好的公司放心。
测序是一个检测手段,切勿十分相信!
23楼2009-05-31 11:08:06
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mwlapple

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
高手好多啊!!长知识!
24楼2009-05-31 16:27:25
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legend0463

金虫 (小有名气)

都可以,看你是做什么以及目的是什么了,如果你是要做转化或构建表达载体,就可以用菌液测序;如果PCR的目的只是检测扩增效果,那测序直接用PCR产物就行了~~
25楼2009-05-31 16:31:50
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

一般用连入T载体的菌液!pcr产物很少用!
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
26楼2009-05-31 16:52:04
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欣晴5832

金虫 (小有名气)


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确实找一个信誉好的公司很重要,对测序过程中出现的问题也能给一个很合理可行的解决方案,测序一定要有重复!
27楼2009-05-31 23:03:47
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695

木虫 (职业作家)

建议克隆后再测序
28楼2009-06-01 00:26:16
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林祎

木虫 (正式写手)

菌液好一点
29楼2009-06-01 09:30:50
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smallcat227

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
两者都可以,pcr产物测序技术确实是近年才发展起来的,相比起菌液方便很多,你甚至可以不纯化产物直接送测,让公司帮你纯化就行,但是成功率相对较低,而且序列两头的大概20-40个碱基可能测不出或者不准确,一般大于400bp的片段可以pcr测序,而且如果公司用引物p不出条带的话还不收钱。
菌液测序是比较经典的方法,不过现对繁琐一点,转化涂板后还要提质粒,可能还要酶切或pcr进一步确定片段插入,但目的片段插入的话成功率很高,而且准确,如果目的片段小于300bp,最好做TA克隆。
送测的菌液不用加甘油,吸过夜培养的菌液1-2ml装离心管测序就OK
30楼2009-06-01 10:10:24
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