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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家测序用pcr产物还是菌液
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
★
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有的公司一个反应可以测到800bp左右，克隆后测序准确度高，PCR产物测序多测几个看序列是否一致，有无杂峰，如果没有也可以。
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21楼2009-05-31 08:15:49
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feng6710

新虫 (初入文坛)
我一直用菌液
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22楼2009-05-31 09:07:55
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
还是送菌液比较合适。
加入不加入甘油问题不大，只要有个活菌带质粒就ok。呵呵这个不是很严格。
测序品质五花八门，还是找信誉比较大比较好的公司放心。
测序是一个检测手段，切勿十分相信！
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23楼2009-05-31 11:08:06
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mwlapple

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
高手好多啊！！长知识！
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24楼2009-05-31 16:27:25
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legend0463

金虫 (小有名气)
都可以，看你是做什么以及目的是什么了，如果你是要做转化或构建表达载体，就可以用菌液测序；如果PCR的目的只是检测扩增效果，那测序直接用PCR产物就行了~~
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25楼2009-05-31 16:31:50
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
一般用连入T载体的菌液！pcr产物很少用！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
26楼2009-05-31 16:52:04
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
★
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确实找一个信誉好的公司很重要，对测序过程中出现的问题也能给一个很合理可行的解决方案，测序一定要有重复！
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27楼2009-05-31 23:03:47
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695

木虫 (职业作家)
建议克隆后再测序
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28楼2009-06-01 00:26:16
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林祎

木虫 (正式写手)
菌液好一点
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29楼2009-06-01 09:30:50
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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两者都可以，pcr产物测序技术确实是近年才发展起来的，相比起菌液方便很多，你甚至可以不纯化产物直接送测，让公司帮你纯化就行，但是成功率相对较低，而且序列两头的大概20-40个碱基可能测不出或者不准确，一般大于400bp的片段可以pcr测序，而且如果公司用引物p不出条带的话还不收钱。
菌液测序是比较经典的方法，不过现对繁琐一点，转化涂板后还要提质粒，可能还要酶切或pcr进一步确定片段插入，但目的片段插入的话成功率很高，而且准确，如果目的片段小于300bp，最好做TA克隆。
送测的菌液不用加甘油，吸过夜培养的菌液1-2ml装离心管测序就OK
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30楼2009-06-01 10:10:24
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