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聚丙烯酰胺凝胶电泳,浓缩胶中蛋白浓缩是什么原理呢？
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聚丙烯酰胺凝胶电泳,浓缩胶中蛋白浓缩是什么原理呢？还有浓缩胶和分离胶的TRIS的PH为什么不一样呢？各起什么作用呢 [ Last edited by amisking on 2009-5-29 at 08:28 ] |
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liuke009
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流，建议正理一下！ 5-29 08:27
sutao1979(金币+2,VIP+0):完全正确 5-29 20:48
xhlxhl(金币+1,VIP+0):谢谢虫友啦~~呵呵 5-30 23:50
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sutao1979(金币+2,VIP+0):完全正确 5-29 20:48
xhlxhl(金币+1,VIP+0):谢谢虫友啦~~呵呵 5-30 23:50
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样品在电泳过程中首先通过浓缩胶，在进入分离胶前由于等速电泳现象而被浓缩。这是由于在电泳缓冲液中主要存在三种阴离子，CL－、甘氨酸阴离子以及蛋白质－SDS 复合物，在浓缩胶的pH 值下，甘氨酸只有少量的电离，所以其电泳迁移率最小，而CL－的电泳迁移率最大。在电场的作用下，CL－最初的迁移速度最快，这样在CL－后面形成低离子浓度区域，即低电导区，而低电导区会产生较高的电场强度，因此CL－后面的离子在较高的电场强度作用下会加速移动。达到稳定状态后，CL－和甘氨酸之间形成稳定移动的界面。而蛋白质－SDS 复合物由于相对量较少，聚集在甘氨酸和Cl－的界面附近而被浓缩成很窄的区带(可以被浓缩三百倍)，所以在浓缩胶中CL－是快离子(前导离子)，甘氨酸是慢离子(尾随离子)。 当甘氨酸到达分离胶后，由于分离胶的pH 值(通常pH = 8.8)较大，甘氨酸离解度加大，电泳迁移速度变大超过蛋白质－SDS 复合物，甘氨酸和Cl－的界面很快超过蛋白质－SDS 复合物。这时蛋白质－SDS 复合物在分离胶中以本身的电泳迁移速度进行电泳，向正极移动。由于蛋白质－SDS 复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。 |
2楼2009-05-29 01:51:25
yuweibest
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