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mengoer

新虫 (小有名气)

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专业: 食品科学

[求助] 重组之后的E.coli长得很慢已有1人参与

1..质粒上插入目的片段（3.7kb+1.2kb+1.2kb），验证成功后，取某管菌液划线，之后再取平板上的单菌落接到加抗生素的试管，有时候隔夜培养，试管不会变浑浊。

2.质粒上插入目的片段（3.7kb+1.2kb+1.2kb），验证成功后，送去测序，同时保了一个甘油管（-80℃)。测序验证成功后，拿出来抗性平板上划线，长了18小时还只有一点点。

3.含原始质粒的E.coli，在试管里养不出来，摇一夜完全澄清，或者液体澄清底部有沉淀。换了好几管E.coli都不行，平行操作的其他质粒有一些是没问题。

最近养菌老是养不出来，求大神指教。@天使托

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1楼 2019-07-14 15:01:04

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zhttt333

新虫 (初入文坛)

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专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫

【答案】应助回帖

Insert gene expression products may be toxic to the host cells.
Tips:
1. Fuse the insert to some known genes to decrease toxicity;
2. Use code changes and /or mutation techniques to decrease toxicity.