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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 重组之后的E.coli长得很慢
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mengoer

新虫 (小有名气)

[求助] 重组之后的E.coli长得很慢 已有1人参与

1..质粒上插入目的片段（3.7kb+1.2kb+1.2kb），验证成功后，取某管菌液划线，之后再取平板上的单菌落接到加抗生素的试管，有时候隔夜培养，试管不会变浑浊。

2.质粒上插入目的片段（3.7kb+1.2kb+1.2kb），验证成功后，送去测序，同时保了一个甘油管（-80℃)。测序验证成功后，拿出来抗性平板上划线，长了18小时还只有一点点。

3.含原始质粒的E.coli，在试管里养不出来，摇一夜完全澄清，或者液体澄清底部有沉淀。换了好几管E.coli都不行，平行操作的其他质粒有一些是没问题。


最近养菌老是养不出来，求大神指教。@天使托
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1楼 2019-07-14 15:01:04
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dhebeh

新虫 (小有名气)
抗生素浓度是多少

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2楼2019-07-14 16:42:46
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mengoer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhebeh at 2019-07-14 16:42:46
抗生素浓度是多少

30μg/mL
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3楼2019-07-16 19:03:53
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Njfuwhy

新虫 (初入文坛)
氯化钠浓度多少

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4楼2019-12-09 23:21:28
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王文文*

新虫 (初入文坛)
我也遇到了这样的问题，请问你找到原因了吗

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5楼2019-12-13 21:27:12
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zhttt333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Insert gene expression products may be toxic to the host cells.
Tips:
1.  Fuse the insert to some known genes to decrease toxicity;
2.  Use code changes and /or mutation techniques to decrease  toxicity.
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6楼2020-01-06 03:14:29
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后来0922

新虫 (初入文坛)
有没有考虑连接成功，但是转化没成功，所以在抗性的板子和培养基上不长，有可能吗？

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7楼2020-01-26 11:36:39
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