| 查看: 665 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
如何消除质粒上的酶切位点
|
|||
|
例如 Hind III 设想用Hind III切开，再把突出的粘性末端削掉，质粒回连，就消除掉了这个位点 查了S1核酸酶的说明书，不理解下面的步骤使用例： DNA单链部分的特异性分解 1. 在微量离心管中配制下列反应液。 DNA 1 μg 10×S1 Buffer 2 μl S1 Nuclease 10 U H2O up to 20 μl 2. 23℃反应15分钟。 3. 用20 μl的20 mM EDTA停止反应。 4. 加入40 μl（等量）的苯酚/氯仿/异戊醇（25 ：24 ：1），充分混匀。 5. 离心，取上层（水层）移至另一微量离心管中。 6. 加入40 μl（等量）的氯仿/异戊醇（24 ：1），充分混匀。 7. 离心，取上层（水层）移至另一微量离心管中。 8. 加入4 μl（1/10量）的3 M NaOAC（pH5.2）。 9. 加入100 μl（2.5倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。 10. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 11. 溶解于适量的TE Buffer后，用Klenow Fragment或T4 DNA Polymerase把DNA片段修复成平滑末端。 第二部分中的步骤是不是可以用酒精沉淀的方法代替？ 既然S1核酸酶可以消除掉单链，为什么后面还要用T4DNA聚合酶修复？ 有没有更好的酶或者方法？ |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
4楼2009-05-27 14:55:50
2楼2009-05-27 10:40:57
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2009-05-27 10:48:10
5楼2009-05-27 14:56:49
