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fkbp23

木虫 (小有名气)

[交流] DTT与蛋白液混合后变黄

请教大家:我的蛋白是溶于Tris缓冲液中,pH8.5,溶液中只有Tris,蛋白浓度为4mg/ml,分别加入三分之一体积的20mM和4mM的DTT(即DTT终浓度分别为5mM和1mM),可是加入后,溶液都变成淡黄色了,透明不浑浊,请问这是为什么呢?是我的蛋白变性了吗?DTT贮存液都是无色透明的。
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jqq1985

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fkbp23(金币+9,VIP+0):谢谢,很有帮助,不过我的蛋白是过柱纯化过的,是不是DTT放置太久被氧化了呢? 5-27 00:49
我也遇到过,应该是DTT变性的缘故,最好先透析然后再加DTT就好了。
3楼2009-05-26 19:20:44
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humants

金虫 (正式写手)


fkbp23(金币+1,VIP+0):谢谢! 5-27 00:47
没见过,我拿去煮也没变黄过
2楼2009-05-26 17:25:02
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jqq1985

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我当时是过完镍柱后,对着含DTT的缓冲透析的发现有黄褐色的沉淀,后来就不在透析液中加DTT,而是充分透析后再加就没有这种现象了。我怀疑是镍柱上的Ni++漏下来了。
4楼2009-05-27 12:26:48
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