| 查看: 1844 | 回复: 2 | ||
[求助]
克雷伯氏菌基因敲除一直失败 已有2人参与
|
|
克雷伯氏菌敲除实验 最近一直失败 决明子_c5iz 从六月十五号到七月初，半个月的时间。用crispcas9敲除克雷伯氏菌的基因一直失败。 敲除步骤如下： 1.往lb培养基中加入kana抗生素，同时加入含有cas9质粒的克雷伯氏菌过夜培养 2.第二天转接二级种子，od等于0. 2时加入l型阿拉伯糖诱导 终浓度10mmol 培养到od等于0.4 ~0.6之间。放冰上半小时 3.四度离心，收集菌体。5000rpm 5min。用10%甘油洗三次，离心三次。 4.加入10%甘油1ml，吹打混匀，分装到1.5ml离心管。加入1000ng的donor片段和120ng的sgrna质粒。2500v 5ms电转，电转后立即加入lb培养基复苏。30度后培养1h离心收集涂布kana和spe双抗性板 5.第三天查看平板菌落生长情况 挑选单菌落进行pcr验证 当前存在问题： 4.收集菌体涂布平板 查看平板菌落生长情况时 发现一直糊板 未发现单菌落 已经更换阿拉伯糖 抗生素也重新配置 sgrna已经更换四对 实在想不出原因 @天使托 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学专业申博
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
评审有感
已经有27人回复
-
论文撤稿了
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
河北省自然科学基金
已经有9人回复
prthefu
木虫 (著名写手)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 2573.9
- 散金: 81
- 红花: 14
- 沙发: 1
- 帖子: 1551
- 在线: 187小时
- 虫号: 3083070
- 注册: 2014-03-24
- 性别: MM
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
2楼2019-08-19 18:42:26
3楼2020-07-01 00:40:34
10