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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我算是跟RNase干上了
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adazalea

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
研磨过程中一定要戴口罩，不要说话，有RNAse的。
离心和温度要注意啊！
祝楼主好运啊！
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朋友是悠闲时最想喝的那杯清茶。
21楼2009-05-27 09:05:56
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎回帖交流！ 5-28 15:25
首先要看你要抽提的样品是什么样品，不同的样品需要不同的处理方式和保存后前处理方式，所以首先要知道你是做什么样品的的。再有，常规来讲RNA是比较好提的，其中细胞最好提，接下来是动物组织和植物组织，植物组织先去杂质，比如多酚多糖，去了杂质提取RNA就像提细胞那样简单了。对于动物组织就又有的分了，是不是难研磨的，是不是核糖核酸酶含量高的等等，都有的分的。如果你不差钱可以选择稍微有针对性一些的RNA抽提试剂盒。接下来操作之前要处理好你整个实验台面和是要要用到的管子和枪头，同样，不差钱可以选择已经处理好了的，超净台和枪啥的可以用Rnase ZAP去除一下RNA酶。再下来就是整个实验操作一定要快，而且常换手套，每次加样都还枪头。如果用T来抽那么一定在吸上清的时候宁可浪费点也不要把中间层吸上来，那可是DNA啊，污染了你还得去基因组DNA污染，所以宁可少吸也别污染。还有什么一下子没想起来，就先说这么多吧。
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22楼2009-05-27 09:46:10
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super1998

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
研磨时间长一点就好,经常加液N
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123
23楼2009-05-27 17:42:47
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ljwei_163

金虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-28 18:14
你用的是TRIZOL吗
把卫生打扫好,提之前用湿拖把拖地.
把桌面用湿布擦一下.
最好戴口罩,不要说话.
按说明书严格进行.
RNA在有机溶剂时还好,不容易降解,象在TRIZOL,氯仿,异丙醇里.
一定要研磨碎,研磨的过程要保持冷冻,别怕浪费液氮
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24楼2009-05-27 18:41:32
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695

木虫 (职业作家)
仔细核对实验步骤
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25楼2009-05-27 21:08:24
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zszj

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道楼主是从什么材料提RNA，我每天从植物中提基本没出过大问题，手套我就用乳胶的不换，只紫外照照，你最后乙醇洗后要吹干，乙醇对后续试验影响较大，但还不能吹得太干，RNA太干不好溶于水，这个要自己掌握，还有就是你异丙醇沉淀时间有可能不够，我一般在低温下沉淀
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26楼2009-05-27 21:54:47
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该不难吧，关键速度快点，即使有RNase污染也不要紧，做普通的RT-PCR都能做出来。我怀疑你是不是电泳检测的时候被降解的比较严重阿？
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27楼2009-05-28 00:21:08
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
我也做了好几回，都是没有成功过，你把每一步再看看，注意下吧！或者到别人那偷师学艺下！
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I am not a hero , but I served with heroes！
28楼2009-05-28 10:08:33
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没提过，希望你能很快成功
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29楼2009-05-28 15:21:55
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cylvzdb

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果一条带都没有的，那就是研磨的问题啦。。。。
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30楼2009-05-28 18:04:19
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