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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


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如果排除操作的原因,那么就有可能是目的样品里面含有的RNA太少,不知道你是如何检测没有提取出来的呢,如果是电泳,拿说明不了问题,如果是RT-PCR,也有可能是在这个过程中损失掉了,一步一步排查,good luck!
52187644
11楼2009-05-26 12:22:35
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ECUST小熊

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
新买的枪头 离心管处理的很仔细.lz是用什么处理的啊?实在不行的话,直接买无RNase的枪头就可以了,不是很贵的,不需要处理并且普通枪头的处理很麻烦的。要确保里面没有一点点的气泡,应全部被DEPC水浸泡的,包括枪头尖的位置。
如果排除这个问题的话,还有就是前面提到的样品问题,或者RNA储备液的问题。
12楼2009-05-26 12:35:51
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bbyu007

木虫 (正式写手)

应该是提取步骤需要优化,离心速度很重要,高或低都不好!

这是我提的:
我是笨笨鱼~~~
13楼2009-05-26 13:19:43
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whiccer

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
再优化一下:操作过程严格,温度控制,无菌操作。
14楼2009-05-26 13:42:29
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jiangyoushuai

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道你提什么样品!要是组织的就用TRIZOL法就可以了。要是细菌或真菌,你就要选择合适的破壁方法了!
运筹帷幄之中,决胜千里之外
15楼2009-05-26 15:09:17
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hulqi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能是你的样品被处理的过程中折腾的太厉害了,mRNA都降解了。我做的是细菌的mRNA提取,每次收完菌后直接放进-70度冰箱,连平时多次洗菌的步骤都省了。害怕降解啊。还好,我每次都提出来了~~~Good Luck
16楼2009-05-26 17:31:03
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112976553

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你研钵怎么处理的,有没有通过DEPC水泡过呢,我马上也要开始做了,偶的神哦! 你这样子的情况让偶很担心哇。
112976553 加QQ交流交流吧
17楼2009-05-26 18:22:29
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guyue2885

银虫 (正式写手)

Shengjing  我是提的花蕾的RNA,第一次提的特别好  但是最近一个月不知道怎么一直没有成果~~我确定能提出来,唯一的注意是操作步骤,但发现越小心越出问题了~~
18楼2009-05-26 19:42:40
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pmay

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
以前我刚开始提RNA的时候也是怎么都提不出来,也不知道什么地方出问题了,郁闷了很久,后来罢工一星期后再提竟然可以提的很好了,所以我觉得可能需要多练习吧,记得研磨的时候一定要带口罩,其他方面注意点,溶液都没有问题,那就离成功不远啦,加油~~
19楼2009-05-26 21:04:46
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临风7071

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实验中一定要少说话,勤换手套!勤擦手!
20楼2009-05-26 23:01:22
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