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qbch0686

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白电泳样品在样品槽中没有跑出,为什么呢?

我采用5%浓缩胶;10%的分离胶进行变性电泳。Marker能跑出,而且条带清晰,但为什么样品槽中的样品没有被跑出呢?
我的样品制备是植物样品,采用SDS、巯基乙醇、溴酚蓝、甘油、1 M Tris-HCl (pH 6. 8)提取,12000g离心后-80度保存。
出现上述原因为什么?请高手给与解答。
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flylxd

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫研究PI

样本是不是降解啦,有测浓度吗,上样量要足
人既然不能选择生死,在这仅有一次生命里,活出自己最大的可能!
2楼2009-05-25 16:11:15
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zengfuxing

银虫 (小有名气)

确定样品还留在样品槽中?
3楼2009-05-25 16:17:09
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qbch0686

铜虫 (小有名气)

确定留在样品槽中,染色可见
4楼2009-05-25 16:25:05
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sky1111

木虫 (正式写手)

上样量是不是太大了,杂质多,堵塞了孔口。样品可能不纯吧。
5楼2009-05-25 20:12:56
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baisuilan

金虫 (正式写手)


qbch0686(金币+1,VIP+0): 5-26 02:59
先裂解,离心之后再加上样缓冲液,然后要在沸水浴煮5分钟让sds与蛋白结合。如果蛋白没结合上SDS,当然跑不动
6楼2009-05-26 02:27:18
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ECUST小熊

木虫 (正式写手)

可能降解掉了。最安全的办法就是提取完蛋白后直接变形保存而不是-80保存。我们一般是80ul蛋白+20ul 5X buffer,95 5min后保存-20,而剩余部分进行定量(上样的时候记得*1.2)。
7楼2009-05-26 12:40:01
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