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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳样品在样品槽中没有跑出，为什么呢？
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qbch0686

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白电泳样品在样品槽中没有跑出，为什么呢？

我采用5%浓缩胶；10%的分离胶进行变性电泳。Marker能跑出，而且条带清晰，但为什么样品槽中的样品没有被跑出呢？
我的样品制备是植物样品，采用SDS、巯基乙醇、溴酚蓝、甘油、1 M Tris-HCl (pH 6. 8）提取，12000g离心后-80度保存。
出现上述原因为什么？请高手给与解答。
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1楼 2009-05-25 15:09:37
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flylxd

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫研究PI
样本是不是降解啦，有测浓度吗，上样量要足
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人既然不能选择生死，在这仅有一次生命里，活出自己最大的可能！
2楼2009-05-25 16:11:15
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zengfuxing

银虫 (小有名气)
确定样品还留在样品槽中？
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3楼2009-05-25 16:17:09
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qbch0686

铜虫 (小有名气)
确定留在样品槽中，染色可见
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4楼2009-05-25 16:25:05
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sky1111

木虫 (正式写手)
上样量是不是太大了，杂质多，堵塞了孔口。样品可能不纯吧。
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5楼2009-05-25 20:12:56
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★
qbch0686(金币+1,VIP+0): 5-26 02:59
先裂解，离心之后再加上样缓冲液，然后要在沸水浴煮5分钟让sds与蛋白结合。如果蛋白没结合上SDS，当然跑不动
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6楼2009-05-26 02:27:18
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ECUST小熊

木虫 (正式写手)
可能降解掉了。最安全的办法就是提取完蛋白后直接变形保存而不是-80保存。我们一般是80ul蛋白+20ul 5X buffer，95 5min后保存-20，而剩余部分进行定量（上样的时候记得*1.2）。
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7楼2009-05-26 12:40:01
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