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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题
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bluesky3858

银虫 (小有名气)

[交流] 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题

各位战友，这两天在做原核表达时遇到了一个问题：
表达产物（菌体超声破碎后的上清液）利用镍柱亲和层析后，纯化的蛋白产物在用Xa因子酶切时出现怪异现象：一加CaCl2就有白色沉淀析出
这是怎么回事啊？还望各位帮我解答一下，多谢啦！
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默默的努力!永远的开心!
1楼 2009-05-25 13:29:37
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biogefart

木虫 (著名写手)

这是Histag表达常遇到的问题

★
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看看相关综述吧
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闹太套
2楼2009-05-25 14:27:40
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
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镍柱纯化后脱盐
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3楼2009-05-25 17:46:39
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bluesky3858

银虫 (小有名气)
我洗脱用的磷酸盐缓冲液，要是用tris-hcl是不是会好点啊？
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默默的努力!永远的开心!
4楼2009-05-25 18:30:47
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
Ca2+  H3PO4----
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-05-26 03:13:44
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
磷酸缓冲液能够洗脱？

蛋白要脱盐，还要保存在适当的缓冲液，要不就说不清了。。。
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6楼2009-05-26 07:35:15
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DLLB

金虫 (小有名气)
★
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我实验室用的Tris-Hcl缓冲液洗脱
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7楼2009-05-26 13:41:13
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
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硫酸钙沉淀？还是磷酸钙沉淀？
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8楼2009-05-26 20:03:51
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zj96sk

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用过tris缓冲液 效果还好
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9楼2009-05-26 22:33:21
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L84429

金虫 (小有名气)
★
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有沉淀，需改变缓冲液。
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10楼2009-05-31 16:35:39
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