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bluesky3858

银虫 (小有名气)

[交流] 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题

各位战友,这两天在做原核表达时遇到了一个问题:
表达产物(菌体超声破碎后的上清液)利用镍柱亲和层析后,纯化的蛋白产物在用Xa因子酶切时出现怪异现象:一加CaCl2就有白色沉淀析出
这是怎么回事啊?还望各位帮我解答一下,多谢啦!
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biogefart

木虫 (著名写手)

这是Histag表达常遇到的问题


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看相关综述吧
闹太套
2楼2009-05-25 14:27:40
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


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镍柱纯化后脱盐
3楼2009-05-25 17:46:39
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bluesky3858

银虫 (小有名气)

我洗脱用的磷酸盐缓冲液,要是用tris-hcl是不是会好点啊?
默默的努力!永远的开心!
4楼2009-05-25 18:30:47
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

Ca2+  H3PO4----
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-05-26 03:13:44
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



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磷酸缓冲液能够洗脱?

蛋白要脱盐,还要保存在适当的缓冲液,要不就说不清了。。。
6楼2009-05-26 07:35:15
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DLLB

金虫 (小有名气)


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我实验室用的Tris-Hcl缓冲液洗脱
7楼2009-05-26 13:41:13
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jqq1985

银虫 (正式写手)


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硫酸钙沉淀?还是磷酸钙沉淀?
8楼2009-05-26 20:03:51
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zj96sk

木虫 (正式写手)


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我用过tris缓冲液 效果还好
9楼2009-05-26 22:33:21
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L84429

金虫 (小有名气)


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有沉淀,需改变缓冲液。
10楼2009-05-31 16:35:39
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