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Shaynin

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 转化DH5a后载体序列是否会丢失部分片段 已有1人参与

请教大神们一个问题,我构建好的载体转化进DH5a之后,测序检测出目的基因片段,但是载体的两端缺失了,这是什么原因?我构建的载体2970bp,已经测了两次了,都是同样的结果,能检测出目的片段,但是载体两端各缺失120bp的序列,后来觉得是生工的测序方法问题,又把质粒转到19T上,让生工重新测序,还是同样的结果。难道载体在转化过程中会丢失两端的片段吗?载体两端是我的PCR引物所在的区域,如果载体两端缺失了,为什么我PCR能扩增出目的条带?做了很久了这个质粒,现在就是两端序列缺失,没办法完成工作。。。很迷。。。
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是不是用自己片段的特异性引物测序的?测序引物本身以及引物位点向后约百来bp的序列范围是测序仪检测不到的
2楼2019-06-20 15:24:03
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