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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 在大肠杆菌中异源表达酵母基因是否需要密码子优化
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Newfish1

铁虫 (初入文坛)

[求助] 在大肠杆菌中异源表达酵母基因是否需要密码子优化 已有1人参与

如题，
1.酵母基因表达系统和大肠有差异，那么异源表达其基因是否需要优化
2.该基因5000bp左右，选择什么启动子比较合适
3.普遍来说，异源表达某基因还需要注意什么
感谢解答，千恩万谢！
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1楼 2019-06-14 19:06:47
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渊博震天
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2楼2019-06-14 19:10:16
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
5000bp的蛋白基本就表达不出来了吗

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3楼2019-06-14 23:59:27
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sannny

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-06-15 22:29:06
鉴于序列太长，合成成本比较高，建议先扩增目的基因做表达，现在可以补充稀有密码子的表达菌挺多的。另外就像楼上说的，蛋白太大，可能表达有困难，但也不是额绝对的，总归要试试。做蛋白表达，千万不要预设立场，比如哪个启动子更好，要不要优化之类的。合理的做法是不同的启动子，不同的标签的表达系统同时做。而不言先做一个，不行，换下一个。不然时间成本是很高的。

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4楼2019-06-15 08:02:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-15 22:29:20
酵母本身也是表达系统，为什么要做异源表达呢?用酵母本身表达系统不是更好？5000 bp的蛋白太大了点，基因克隆本身可能就比较难，再加上表达，时间周期会比较长。祝福！
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5楼2019-06-15 09:10:56
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Newfish1

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sannny at 2019-06-15 08:02:05
鉴于序列太长，合成成本比较高，建议先扩增目的基因做表达，现在可以补充稀有密码子的表达菌挺多的。另外就像楼上说的，蛋白太大，可能表达有困难，但也不是额绝对的，总归要试试。做蛋白表达，千万不要预设立场，比 ...

感谢解答，另外可否讲一下补充稀有密码子表达是如何操作的

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6楼2019-06-15 12:40:22
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Newfish1

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-15 09:10:56
酵母本身也是表达系统，为什么要做异源表达呢?用酵母本身表达系统不是更好？5000 bp的蛋白太大了点，基因克隆本身可能就比较难，再加上表达，时间周期会比较长。祝福！

异源表达是代谢工程的常用手段吧，一来可以让基因表达不受宿主控制，二来很大可能性降低反馈抑制

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7楼2019-06-15 12:44:55
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sannny

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Newfish1 at 2019-06-15 12:40:22
感谢解答，另外可否讲一下补充稀有密码子表达是如何操作的
...

比如BL21（DE3）codonplus   比如Rosetta gami  B


楼里有人说了啊，既然是酵母的蛋白，完全可以用毕赤酵母表达系统做啊。

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8楼2019-06-15 15:08:14
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