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Newfish1

铁虫 (初入文坛)

[求助] 在大肠杆菌中异源表达酵母基因是否需要密码子优化 已有1人参与

如题,
1.酵母基因表达系统和大肠有差异,那么异源表达其基因是否需要优化
2.该基因5000bp左右,选择什么启动子比较合适
3.普遍来说,异源表达某基因还需要注意什么
感谢解答,千恩万谢!
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2楼2019-06-14 19:10:16
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


5000bp的蛋白基本就表达不出来了吗

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3楼2019-06-14 23:59:27
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sannny

新虫 (正式写手)

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-06-15 22:29:06
鉴于序列太长,合成成本比较高,建议先扩增目的基因做表达,现在可以补充稀有密码子的表达菌挺多的。另外就像楼上说的,蛋白太大,可能表达有困难,但也不是额绝对的,总归要试试。做蛋白表达,千万不要预设立场,比如哪个启动子更好,要不要优化之类的。合理的做法是不同的启动子,不同的标签的表达系统同时做。而不言先做一个,不行,换下一个。不然时间成本是很高的。

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4楼2019-06-15 08:02:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-15 22:29:20
酵母本身也是表达系统,为什么要做异源表达呢?用酵母本身表达系统不是更好?5000 bp的蛋白太大了点,基因克隆本身可能就比较难,再加上表达,时间周期会比较长。祝福!
5楼2019-06-15 09:10:56
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Newfish1

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sannny at 2019-06-15 08:02:05
鉴于序列太长,合成成本比较高,建议先扩增目的基因做表达,现在可以补充稀有密码子的表达菌挺多的。另外就像楼上说的,蛋白太大,可能表达有困难,但也不是额绝对的,总归要试试。做蛋白表达,千万不要预设立场,比 ...

感谢解答,另外可否讲一下补充稀有密码子表达是如何操作的

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6楼2019-06-15 12:40:22
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Newfish1

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-15 09:10:56
酵母本身也是表达系统,为什么要做异源表达呢?用酵母本身表达系统不是更好?5000 bp的蛋白太大了点,基因克隆本身可能就比较难,再加上表达,时间周期会比较长。祝福!

异源表达是代谢工程的常用手段吧,一来可以让基因表达不受宿主控制,二来很大可能性降低反馈抑制

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7楼2019-06-15 12:44:55
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sannny

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Newfish1 at 2019-06-15 12:40:22
感谢解答,另外可否讲一下补充稀有密码子表达是如何操作的
...

比如BL21(DE3)codonplus   比如Rosetta gami  B


楼里有人说了啊,既然是酵母的蛋白,完全可以用毕赤酵母表达系统做啊。

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8楼2019-06-15 15:08:14
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