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hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 酶切问题,请高人指点!!!

下面是我提DNA后用酶切的图片,1-----7泳道分别是:MARK, 样品,Ecoil, MSP,HAP2,  Ecoil+msp1,Ecoil+hap2.上面总是有主带隐约出现,不知道是DNA问题还是 什么 ??请高人指点
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

没切干净,鉴定完毕
2楼2009-05-24 11:41:46
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

怎么才能切干净?看我的DNA还有没有什么问题?谢谢
3楼2009-05-24 11:42:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

其实你提的DNA都还好啦,完整性和纯度都应该不错
这种情况下切干净无非就是切久一点或者用好的酶
用NEB的或者Fermentas的酶都很不错
当然了,还有就是控制酶切的量,要按照酶活定义加DNA的量,超量就要多加酶或者延长时间
4楼2009-05-24 11:45:46
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

好的,谢谢,可能是这方面的问题,我把原来切过的再加点酶切一下午,上次切了12个小时,时间应该足够长了,可能是酶量不够把,我主要是担心DNA出问题,呵呵
5楼2009-05-24 12:02:44
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月月大可

木虫 (著名写手)

加酶的量是由限定的,一般来说加酶的量不要超过总体系的10%!
因为平常我们所使用的内切酶中都有50%的甘油,而当甘油的量超过总体系的5%时就会对酶活性造成影响。
6楼2009-05-24 12:24:48
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

效果不是很理想,还隐约有主带出现,是不是DNA加多了,最近分光光度计测出DNA浓度不是很准,我酶切了5微升的样,晚上用3微升试下
7楼2009-05-24 17:42:46
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biogefart

木虫 (著名写手)

你切的是基因组吧?

弥散应该是正常的
闹太套
8楼2009-05-24 19:17:26
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

切得是基因组,弥散正常,主要是上面主带还有点显,我是想把它彻底切干净,不留主带
9楼2009-05-25 14:11:50
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