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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题，请高人指点！！！
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 酶切问题，请高人指点！！！

下面是我提DNA后用酶切的图片，1-----7泳道分别是：MARK, 样品，Ecoil, MSP,HAP2,  Ecoil+msp1,Ecoil+hap2.上面总是有主带隐约出现，不知道是DNA问题还是 什么 ？？请高人指点
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1楼 2009-05-24 11:40:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
没切干净，鉴定完毕
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2楼2009-05-24 11:41:46
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
怎么才能切干净？看我的DNA还有没有什么问题？谢谢
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3楼2009-05-24 11:42:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
其实你提的DNA都还好啦，完整性和纯度都应该不错
这种情况下切干净无非就是切久一点或者用好的酶
用NEB的或者Fermentas的酶都很不错
当然了，还有就是控制酶切的量，要按照酶活定义加DNA的量，超量就要多加酶或者延长时间
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4楼2009-05-24 11:45:46
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
好的，谢谢，可能是这方面的问题，我把原来切过的再加点酶切一下午，上次切了12个小时，时间应该足够长了，可能是酶量不够把，我主要是担心DNA出问题，呵呵
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5楼2009-05-24 12:02:44
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月月大可

木虫 (著名写手)
加酶的量是由限定的，一般来说加酶的量不要超过总体系的10%！
因为平常我们所使用的内切酶中都有50%的甘油，而当甘油的量超过总体系的5%时就会对酶活性造成影响。
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6楼2009-05-24 12:24:48
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
效果不是很理想，还隐约有主带出现，是不是DNA加多了，最近分光光度计测出DNA浓度不是很准，我酶切了5微升的样，晚上用3微升试下
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7楼2009-05-24 17:42:46
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biogefart

木虫 (著名写手)

你切的是基因组吧？

弥散应该是正常的
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闹太套
8楼2009-05-24 19:17:26
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
切得是基因组，弥散正常，主要是上面主带还有点显，我是想把它彻底切干净，不留主带
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9楼2009-05-25 14:11:50
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