24小时热门版块排行榜    

查看: 374  |  回复: 8
当前主题已经存档。

buffoon_1985

银虫 (小有名气)

[交流] 连接检验问题

我用PCR片段去连接载体质粒
挑取转化子后做菌落PCR,有明显目的条带出现
但是提质粒后,连接片段却不能酶切出来,这是为什么捏
很费解啊,各位帮个忙解释下~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

连接片段多长?所谓的酶切不出来是什么意思?
2楼2009-05-24 11:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buffoon_1985

银虫 (小有名气)

连接片段500bp
酶切不出来500bp的连接条带
BamHI酶切的,效率我觉得应该没问题

[ Last edited by buffoon_1985 on 2009-5-24 at 11:13 ]
3楼2009-05-24 11:12:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

有可能是上样量小看不见500bp的带
你用单酶切的方法比较空质粒和菌落PCR阳性的质粒比较
当然前提是质粒本身也不会太大
一般来说,我做到菌落PCR阳性就停了,不继续做了
直接送测序
4楼2009-05-24 11:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buffoon_1985

银虫 (小有名气)

嘿嘿
我的质粒就是很大7k
上样5微升应该也没问题哈
测序至今没做过
5楼2009-05-24 14:35:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)

提取的质粒的质量如何?量太少是切不出来亮条带的
6楼2009-05-24 14:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wfmgood

银虫 (小有名气)

建议确定以下几点:
提取质粒的纯度与浓度?
酶切体系:酶是否失活,酶切时间等等?
7楼2009-05-24 15:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

质粒与目的片段大小太悬殊的话,切下的目的片段亮度会不够,可能看不见。
pcr能p出来应该就没问题了。
我有个构建的质粒也是的,pcr没问题。
双酶切总是只能切开,和两种酶各自单酶切一样的效果。
单酶切后回收,再用另外一种酶酶切仍然不行,我崩溃不管了。
Thank-you,so-blue.
8楼2009-05-24 18:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buffoon_1985

银虫 (小有名气)

提的质粒还是很亮的哈~
susizheng也是这样哈?很奇妙的。。。
另外谢谢大家的关注啊~
9楼2009-05-25 15:00:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 buffoon_1985 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见