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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因的分段克隆问题
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endura亦

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因的分段克隆问题 已有1人参与

将基因分成了上下两段进行克隆，分别用引物上段F-R1，下段F2-R。上下两段的R1和F2在重叠区内。现在也得到了上下段序列，测序也正确，但是怎么得到序列的全长啊？已经尝试用F，R做引物，用测序得到的上下段质粒作模板来扩增全长，但是扩出来的还是原来上下段序列大小的两条带，得不到全长。各位大神们，求帮忙啊

@wizardfan @biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2019-06-10 15:35:57
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
融合pcr

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5楼2019-06-11 13:06:31
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KI2018

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2019-06-10 15:37:13
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endura亦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by KI2018 at 2019-06-10 15:37:13
研一么，刚开始别着急，慢慢来

急呀，有好的方法吗

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3楼2019-06-10 17:13:59
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接分段PCR，将产物做模板并利用上下游引物融合PCR即可，不用分别克隆到质粒上。另外，你的片段是故意分成两段的吗？还是为了克隆全长而分成两段？现在很多好的酶可以扩增2,300bp的片段都没有问题，如果太长了，融合PCR估计也很难解决。
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4楼2019-06-10 18:10:17
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