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endura亦

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因的分段克隆问题 已有1人参与

将基因分成了上下两段进行克隆,分别用引物上段F-R1,下段F2-R。上下两段的R1和F2在重叠区内。现在也得到了上下段序列,测序也正确,但是怎么得到序列的全长啊?已经尝试用F,R做引物,用测序得到的上下段质粒作模板来扩增全长,但是扩出来的还是原来上下段序列大小的两条带,得不到全长。各位大神们,求帮忙啊

@wizardfan @biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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KI2018

禁虫 (著名写手)

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2楼2019-06-10 15:37:13
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endura亦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by KI2018 at 2019-06-10 15:37:13
研一么,刚开始别着急,慢慢来

急呀,有好的方法吗

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3楼2019-06-10 17:13:59
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接分段PCR,将产物做模板并利用上下游引物融合PCR即可,不用分别克隆到质粒上。另外,你的片段是故意分成两段的吗?还是为了克隆全长而分成两段?现在很多好的酶可以扩增2,300bp的片段都没有问题,如果太长了,融合PCR估计也很难解决。
4楼2019-06-10 18:10:17
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

5楼2019-06-11 13:06:31
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