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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因验证克隆 急急急
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小木頭

新虫 (小有名气)

[求助] 基因验证克隆 急急急 已有1人参与

从本实验室三代库里找到了目的基因全长，不用克，只对他进行验证，问题1：验证的时候是选ORF还是CDS进行验证？2.验证用ncbi设引物的时候，引物要不要覆盖整个ORF或CDS？
自己选的ORF进行验证，但也有人用CDS进行验证。这是怎么回事？设引物设了两对，但没有覆盖整个ORF，不知道这样弄对不对？
送测的时候 我送的是pcr未纯化，也就是只看了看电泳条带是一条就送测了，有些人验证基因是阳性菌送测，请问这种情况该怎么选择？

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1楼 2019-06-10 00:27:39
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1272356152

新虫 (正式写手)
私聊我

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2楼2019-06-10 00:50:00
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美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做
加油加油

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3楼2019-06-10 07:20:50
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)
orf和cds区别是什么，cds是大于orf吗，比如包括非编码区序列？

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让羽毛再飞一会儿
4楼2019-06-10 07:31:29
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般验证CDS即可。别人做好的克隆，应该是测过序的，个人觉得可以直接拿来用的。你们实验室克隆过的，你可以小提质粒直接送测序就行了。如果你再做其他克隆，构建的质粒片段需要完全构建好再去测序，送PCR产物没有意义。
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5楼2019-06-10 08:01:24
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)
真核生物的cds不就是该序列的最长orf吗，只是cDNA是大于ORF或CDS的。

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让羽毛再飞一会儿
6楼2019-06-12 23:09:56
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