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yelinlin

木虫 (著名写手)

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[交流] 细菌DNA

我在提取细菌DNA的过程中，加了氯仿异戊醇离心后，上层不澄清，有点浑浊，可有虫虫知道是什么原因啊！

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]

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1楼 2009-05-23 15:30:23

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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

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专业: 微生物生理与生物化学

不知楼主提的是阴性菌, 还是阳性菌, 这两种菌的处理方法还是有一些差别的。
如你现在说的问题，应该从几个方面来分析：
1、苯酚是否已经被氧化。苯酚通常都是4度放置，如果经常使用，或在室温放置的话，很容易被氧化，这时颜色很发生变化，会氧化成粉红色（浅红）。这时应及时更换苯酚，否则无法达到抽提DNA的效果；
2、菌体量过大。应该用适量的菌体提取gDNA，并不是菌体量越大，gDNA产量就越高。当菌体量太大时，会使前期处理的菌体无法彻底裂解，无法彻底释放出ｇＤＮＡ，很多蛋白也就无法处理变性，很难抽提干净。
３、菌体保外多糖等物质太多，影响菌体裂解等处理，可以先用ＰＢＳ或生理盐水处理样品；
４、如果不是以上原因造成的，可以再抽提１－２次，以达到上层澄清，彻底去蛋白。
　　总之，楼主要对自己研究的菌株有一定的了解，并对自己采用的提ＤＮＡ的方法通晓，这样才好分析问题。
　　以上是本人拙见，请大家指正。谢谢！

[ Last edited by bioartist on 2009-5-24 at 09:02 ]