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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌DNA
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yelinlin

木虫 (著名写手)

[交流] 细菌DNA

我在提取细菌DNA的过程中，加了氯仿异戊醇离心后，上层不澄清，有点浑浊，可有虫虫知道是什么原因啊！

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]
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1楼 2009-05-23 15:30:23
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anik

银虫 (正式写手)
有没有离心阿。。。
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2楼2009-05-23 18:04:18
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在雨中

金虫 (著名写手)
离心没有放平，震荡了吧？或者说你的转速不够高。
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3楼2009-05-23 19:12:30
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yelinlin

木虫 (著名写手)
离心也，就是有很多絮状的东西啊
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4楼2009-05-23 19:38:36
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
离心转数不够
或是操作不小心 弄混了
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海纳百川止于至善
5楼2009-05-23 19:48:18
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adazalea

金虫 (正式写手)
应该是蛋白！你应该用三个配比：氯仿：异戊醇：酚.........
要不你就离心时间延长一下就可以了，加到二十分钟！
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朋友是悠闲时最想喝的那杯清茶。
6楼2009-05-23 22:03:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
加大酚-氯仿的用量，有可能是蛋白抽提不充分
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7楼2009-05-23 22:29:04
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
不知楼主提的是阴性菌, 还是阳性菌, 这两种菌的处理方法还是有一些差别的。
如你现在说的问题，应该从几个方面来分析：
1、苯酚是否已经被氧化。苯酚通常都是4度放置，如果经常使用，或在室温放置的话，很容易被氧化，这时颜色很发生变化，会氧化成粉红色（浅红）。这时应及时更换苯酚，否则无法达到抽提DNA的效果；
2、菌体量过大。应该用适量的菌体提取gDNA，并不是菌体量越大，gDNA产量就越高。当菌体量太大时，会使前期处理的菌体无法彻底裂解，无法彻底释放出ｇＤＮＡ，很多蛋白也就无法处理变性，很难抽提干净。
３、菌体保外多糖等物质太多，影响菌体裂解等处理，可以先用ＰＢＳ或生理盐水处理样品；
４、如果不是以上原因造成的，可以再抽提１－２次，以达到上层澄清，彻底去蛋白。
　　总之，楼主要对自己研究的菌株有一定的了解，并对自己采用的提ＤＮＡ的方法通晓，这样才好分析问题。
　　以上是本人拙见，请大家指正。谢谢！

[ Last edited by bioartist on 2009-5-24 at 09:02 ]
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8楼2009-05-24 09:00:50
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yelinlin

木虫 (著名写手)
谢谢楼上给的分析，应该不是苯酚氧化，我是放在四度冰箱的，
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9楼2009-05-24 17:43:00
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xuli1675

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我在提总DNA时也出现过这种情况 不管怎么晃动，最后离心的结果都是上层比下层还浑浊一些，不知道进去了什么杂物，苯酚有些黄色但应该是没问题的，我最后提的dna也总是会出现黄色，不知道原因
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10楼2009-08-10 21:59:43
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