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yelinlin

木虫 (著名写手)

[交流] 细菌DNA

我在提取细菌DNA的过程中,加了氯仿异戊醇离心后,上层不澄清,有点浑浊,可有虫虫知道是什么原因啊!

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]
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anik

银虫 (正式写手)

有没有离心阿。。。
2楼2009-05-23 18:04:18
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在雨中

金虫 (著名写手)


离心没有放平,震荡了吧?或者说你的转速不够高。
3楼2009-05-23 19:12:30
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yelinlin

木虫 (著名写手)

离心也,就是有很多絮状的东西啊
4楼2009-05-23 19:38:36
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

离心转数不够
或是操作不小心 弄混了
海纳百川止于至善
5楼2009-05-23 19:48:18
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adazalea

金虫 (正式写手)

应该是蛋白!你应该用三个配比:氯仿:异戊醇:酚.........
要不你就离心时间延长一下就可以了,加到二十分钟!
朋友是悠闲时最想喝的那杯清茶。
6楼2009-05-23 22:03:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

加大酚-氯仿的用量,有可能是蛋白抽提不充分
7楼2009-05-23 22:29:04
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

不知楼主提的是阴性菌, 还是阳性菌, 这两种菌的处理方法还是有一些差别的。
如你现在说的问题,应该从几个方面来分析:
1、苯酚是否已经被氧化。苯酚通常都是4度放置,如果经常使用,或在室温放置的话,很容易被氧化,这时颜色很发生变化,会氧化成粉红色(浅红)。这时应及时更换苯酚,否则无法达到抽提DNA的效果;
2、菌体量过大。应该用适量的菌体提取gDNA,并不是菌体量越大,gDNA产量就越高。当菌体量太大时,会使前期处理的菌体无法彻底裂解,无法彻底释放出gDNA,很多蛋白也就无法处理变性,很难抽提干净。
3、菌体保外多糖等物质太多,影响菌体裂解等处理,可以先用PBS或生理盐水处理样品;
4、如果不是以上原因造成的,可以再抽提1-2次,以达到上层澄清,彻底去蛋白。
  总之,楼主要对自己研究的菌株有一定的了解,并对自己采用的提DNA的方法通晓,这样才好分析问题。
  以上是本人拙见,请大家指正。谢谢!

[ Last edited by bioartist on 2009-5-24 at 09:02 ]
8楼2009-05-24 09:00:50
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yelinlin

木虫 (著名写手)

谢谢楼上给的分析,应该不是苯酚氧化,我是放在四度冰箱的,
9楼2009-05-24 17:43:00
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xuli1675


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在提总DNA时也出现过这种情况 不管怎么晃动,最后离心的结果都是上层比下层还浑浊一些,不知道进去了什么杂物,苯酚有些黄色但应该是没问题的,我最后提的dna也总是会出现黄色,不知道原因
10楼2009-08-10 21:59:43
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