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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助退火温度筛选
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禁虫 (小有名气)
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1楼 2019-05-30 22:43:58
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眺望爱

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
??筛选出一条引物的退火温度是啥情况?这是谁教你的PCR操作?退火温度不是看引物那么点的，而是要看你要扩的基因片段的GC，GC越高，所要破开氢键的数量越多，退火温度也要越高。如果退火温度低了，会出现多带杂带，如果高了，会糊掉，你这八成是退火温度高了。一般GC62到50百分比的都可以用60度或者62度将0.2摄氏度来退火。

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目标：生物的星辰大海！！！！
2楼2019-05-30 23:39:32
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度是根据引物来定的，毕竟是引物结合模板的浓度。一般情况下，52-62度范围内都是可以的，温度越高，特异性越好。如果引物已经定了，你可以做降落PCR看是否有改观。然后不行的话，买最好的酶试试。
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3楼2019-05-31 10:29:19
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