24小时热门版块排行榜    

查看: 549  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] 如何准确的筛选重组子

我是在pet32a质粒中插入一个92bp的目的基因,连接之后涂平板挑取阳性克隆单菌落培养后提取质粒,用这些质粒做模板用目的基因引物来扩增,并用了一个空白的质粒来扩增做对照,跑电泳后显示所有的质粒都扩增出来了一条相同大小的片段,包括那个空白的质粒,现在我该怎么样来准确的筛选到底哪些是我所需要的已经连接上的重组子?谢谢帮忙解答,不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

插入片断很小,pcr容易出现假阳性
建议可以挑一个能扩出比较粗亮条带的重组菌去测序
4楼2009-05-21 21:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):欢迎常来!谢谢 5-21 20:17
首先,保证你PCR过程中没有其他物质的污染导致了结果的无法判定。然后由于你连接的外源片断比较小,所以直接电泳肯定是分不开的。我建议用两种或者两种以上的检测手段进行检测,比如说你做的PCR,或者选择不同的内切酶进行比较,只是用酶进行检测的时候最好是双酶切,这样能在电泳的时候显示出差别。
52187644
2楼2009-05-21 19:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)


sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):欢迎常来参与讨论! 5-21 20:17
直接测序,现在测序真的是很便宜了
3楼2009-05-21 19:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

PCR鉴定是第一步,第二步,也就是最关键的是表达鉴定!
另外,PCR鉴定时没必要提取质粒来做模板,直接取1微升菌液为模板来PCR就是。挑选PCR鉴定为阳性的克隆,摇菌做表达鉴定。
表达鉴定也呈阳性的,再送菌液去测序(2、30块钱一个样)。
这样下来就能确保你的克隆构建正确。
5楼2009-05-22 08:45:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +8 Mr. Z 2026-03-25 8/400 2026-03-25 23:00 by peike
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见