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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE之前，如何处理得粗酶液
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yuweibest

木虫 (正式写手)

[交流] SDS-PAGE之前，如何处理得粗酶液

做重组菌，需要将表达的蛋白进行SDS-PAGE，电泳结果总是找不到目的条带，怀疑是电泳前得粗酶液的方法有问题，现求助上样5*BUFF和双蒸水各加多少？以及水浴煮沸10分钟之后多少转离心？或者还有什么其他方法可供使用？感谢回答！
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1楼 2009-05-21 15:33:08
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DLLB

金虫 (小有名气)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):欢迎常来参与讨论！ 5-21 20:37
我们实验室是这样做的，如果是菌液煮沸10分钟直接上样的话，在OD为2时，加80微升水20微升5Xbuffer,上样5微升，按OD值大小做比例调整。如果上粗酶液的话，要保证目的蛋白达到微克级才能检测到。
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2楼2009-05-21 16:20:51
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