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Misterboy铁虫 (正式写手)
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overlap PCR 已有2人参与
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| 有一个大约10kb的片段，分成两段，用PCR扩增出来了，且两片段之间有25BP的同源臂，现在用overlap PCR一直扩不出目的片段，出现了非特异型扩增，primer用的还是原来的，一个片段的上游引物，一个片段的下游引物，延伸时间增加了一倍，但一直做不出来，各位有为有好一点的建议？ |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:21:08
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:21:08
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10kb很大了，这个延伸应该要很久吧，你可以把overlap搞长一点啊，比如如果总共两百条编号引物，1-100扩一个，97或者99-200扩一个，这样overlap不就够长了嘛，overlap很重要的，重组还是扩增，短了就没法成功。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2019-05-30 16:57:28
qingai0128
木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 1910.1
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- 注册: 2009-07-23
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
2楼2019-05-09 10:19:55
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-10 17:53:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-10 17:53:52
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建议先不加引物，其他正常加，进行10个循环，待温度下降，再加上引物进行30个循环 发自小木虫Android客户端 |
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Misterboy3楼2019-05-09 22:38:57
4楼2019-05-09 22:40:27
100