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小木頭新虫 (小有名气)
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脑和肝脏RNA提取 已有1人参与
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脑RNA能提出来，虽然拖带但也可以用，但肝脏的RNA总是提不出来，虽然纯度够了，但降解很严重，根本不能用，这种情况要怎么处理？ 发自小木虫IOS客户端 |
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choujiaoqi
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2楼2019-04-30 18:00:30
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【答案】应助回帖
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取样的时候立马液氮速冻，这个应该是做到了。你试一下买qiagen RNeasy mini KIT，这款盒子裂解液中加巯基乙醇能有效抑制RNase活性。我们实验室提取的成熟方案是每个1.5ml RNase-free EP管里加100ul 裂解液RLT（已加巯基乙醇），拿手术刀 切块 米粒大 （宁少勿多！！）的肝脏组织，立即浸入裂解液，电动匀浆仪（天根牌）匀浆，涡旋混匀。后面结果很好，检测RIN值在8、9左右。 或者你用trizol提取的时候，在trizol里加2%-5%的巯基乙醇。 取样：肝脏富含RNA酶，而且RNA含量丰富，取样宁少勿多。米粒大小的不方便用研钵研磨，最好买个电动匀浆仪，也不贵，好像几百块而已。  |
3楼2019-05-15 11:16:31