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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

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[交流] 质粒转染

用脂质体转染质粒入树突状细胞，结果转染后48小时，细胞数量明显减少，用台盼兰技术发现剩余的细胞也有近一半死亡，但用RT－PCR仍能扩增出目的基因，这是不是说明还是有成功转染进去的呢！细胞大量死亡可能是什么原因呢？请各位指教？谢谢！

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1楼2019-04-29 17:08:06

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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

RT-PCR只能说明剩下存活的细胞中有成功转染进去的，不能保证每个细胞都转进去，还要用G418筛选，设个未转染的对照，一系列G418浓度作用，第10-14天中一种浓度作用的细胞全部死亡，较此浓度高一级的浓度作为最佳浓度，作用转染细胞，对照组死亡后（一般在8-10天）G418浓度减半，至于转染也是可以使用RFECT的，维持至第14天左右，得到的较少细胞就是转染成功的。