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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒转染

用脂质体转染质粒入树突状细胞,结果转染后48小时,细胞数量明显减少,用台盼兰技术发现剩余的细胞也有近一半死亡,但用RT-PCR仍能扩增出目的基因,这是不是说明还是有成功转染进去的呢!细胞大量死亡可能是什么原因呢?请各位指教?谢谢!
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junjieshao

禁虫 (小有名气)


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2楼2019-04-29 22:25:57
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

RT-PCR只能说明剩下存活的细胞中有成功转染进去的,不能保证每个细胞都转进去,还要用G418筛选,设个未转染的对照,一系列G418浓度作用,第10-14天中一种浓度作用的细胞全部死亡,较此浓度高一级的浓度作为最佳浓度,作用转染细胞,对照组死亡后(一般在8-10天)G418浓度减半,至于转染也是可以使用RFECT的,维持至第14天左右,得到的较少细胞就是转染成功的。
3楼2019-04-30 15:49:06
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junjieshao

禁虫 (小有名气)


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4楼2019-05-01 03:52:16
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