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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » NI柱使用
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huolizwh

银虫 (初入文坛)

[交流] NI柱使用

我在做NI亲和层析时，洗脱下来的样品冻存后有沉淀析出，如何避免其产生，能否将沉淀在溶回去了。
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1楼 2009-05-19 06:06:27
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lifefamily

你把沉淀跑个电泳看看，是不是蛋白？
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2楼2009-05-19 10:18:54
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GinTonic

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huolizwh at 2009-5-19 06:06:
我在做NI亲和层析时，洗脱下来的样品冻存后有沉淀析出，如何避免其产生，能否将沉淀在溶回去了。

楼主啊 能不能把你NI亲和层析的方法给俺一份啊 最近做纯化，穿透液里很多，纯化的带很淡，谢谢了 dym06@163.com
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3楼2009-05-19 11:03:09
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huolizwh

银虫 (初入文坛)
电泳结果显示，我的蛋白基本上都在沉淀里，不知如何解决。
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4楼2009-05-19 20:56:47
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GinTonic

金虫 (小有名气)
在沉淀里说明形成包涵体了吧
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5楼2009-05-20 09:40:00
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
主要的原因是经过冻存之后，有少量的蛋白沉淀，这个正常，一般融化之后，沉淀也消失了；如果不消失，也不会对后续实验影响，只不过浓度可能会降低一点
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-05-20 14:44:27
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jqq1985

银虫 (正式写手)
你洗脱的样品为什么不透析呢？这样保存不好吧。
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7楼2009-05-20 18:22:50
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lifefamily

那就说明你的蛋白不能冻啊！
又不是所有的蛋白都能冻存？
而且，Ni洗脱液你用的是什么？高盐的吧？洗脱下来后有没有经过透析就直接冻存了？
在高盐的溶液里冻存，蛋白更易析出。
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8楼2009-05-22 08:33:50
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
纯化的蛋白是否脱盐？浓度是否太高？蛋白是否容易变性？
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52187644
9楼2009-05-22 11:25:38
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