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huolizwh

银虫 (初入文坛)

[交流] NI柱使用

我在做NI亲和层析时,洗脱下来的样品冻存后有沉淀析出,如何避免其产生,能否将沉淀在溶回去了。
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lifefamily

你把沉淀跑个电泳看看,是不是蛋白?
2楼2009-05-19 10:18:54
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GinTonic

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by huolizwh at 2009-5-19 06:06:
我在做NI亲和层析时,洗脱下来的样品冻存后有沉淀析出,如何避免其产生,能否将沉淀在溶回去了。

楼主啊 能不能把你NI亲和层析的方法给俺一份啊 最近做纯化,穿透液里很多,纯化的带很淡,谢谢了 dym06@163.com
3楼2009-05-19 11:03:09
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huolizwh

银虫 (初入文坛)

电泳结果显示,我的蛋白基本上都在沉淀里,不知如何解决。
4楼2009-05-19 20:56:47
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GinTonic

金虫 (小有名气)

在沉淀里说明形成包涵体了吧
5楼2009-05-20 09:40:00
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

主要的原因是经过冻存之后,有少量的蛋白沉淀,这个正常,一般融化之后,沉淀也消失了;如果不消失,也不会对后续实验影响,只不过浓度可能会降低一点
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2009-05-20 14:44:27
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jqq1985

银虫 (正式写手)

你洗脱的样品为什么不透析呢?这样保存不好吧。
7楼2009-05-20 18:22:50
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lifefamily

那就说明你的蛋白不能冻啊!
又不是所有的蛋白都能冻存?
而且,Ni洗脱液你用的是什么?高盐的吧?洗脱下来后有没有经过透析就直接冻存了?
在高盐的溶液里冻存,蛋白更易析出。
8楼2009-05-22 08:33:50
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

纯化的蛋白是否脱盐?浓度是否太高?蛋白是否容易变性?
52187644
9楼2009-05-22 11:25:38
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