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czbd2016

铜虫 (小有名气)

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[交流] HL-60细胞转染后进行G418筛选已有2人参与

HL-60细胞转染培养4-6小时后，需要向培养瓶中加入含血清的培养基还是先去除原来的不含血清的培养基，再加入含血清及双抗的培养基？请问转染后G418的筛选浓度多少最为适宜应为多少？

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1楼 2019-04-26 08:56:41

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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由于基因转染到细胞到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早，但也不能太晚，因为转染了外援基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，我们实验室一般在RFect-siRNA转染24h后才开始加G418筛选。随着下包的代谢G418的浓度和活性都会下降，所以每3-5天都需要更换一次含有G418的筛选液，这是药物浓度可以降至200ug/ml